بررسي ميزان آلودگي عسل هاي توليد شده در زنبورستان هاي استان تهران به اسپورهاي پني باسيلوس لاروا لارو ا (عامل بيماري لوك آمريكايي) با روش كشت وPCR.

Spores(the causative agent of American foulbrood) Survey of contamination rate of Paenibacillus larvae larvae In the produced honey in apiaries of Tehran province by culture and PCR

مقدمه: بيماري لوك آمريكايي زنبور عسل از بيماريهاي بسيار مهم و نابود كننده لاروهاي زنبور عسل مي باشد. جداسازي پني باسيلوس لاروا لاروا عامل بيماري لوك امريكايي از نمونه هاي لارو بيمار يا مشكوك به بيماري مهمترين روش تاييد تشخيص محسوب ميشود. با توجه به اين كه نمونه گيري از عسل بسيار آسان تر از سايرروش هاي نمونه گيري (لارو، موم، ...) مي باشد و همچنين مزاحمت كمتري براي كلني ها وزنبورداران ايجاد مي نمايد. امروزه استفاده از نمونه هاي عسل براي تاييد تشخيص باليني و رديابي آلودگي در زنبورستانها بسيار رايج گرديده است. هدف از اين مطالعه تعيين ميزان شيوع آلودگي به پني باسيلوس لاروا لاروا در زنبورستانهاي استان تهران از طريق كشت و جدا سازي باكتري از نمونه هاي عسل و PCR ان براي تشخيص نهايي باكتري پني باسيلوس لاروا لاروا به جاي تست هاي بيوشيميايي كه بسيار زمان بر و پر هزينه بوده و گاهي با نتايج گمراه كننده همراه هستند، مي باشد. روش كار: تعداد 121 نمونه عسل از زنبورداري هاي سطح استان تهران (قديم) به صورت تصادفي انتخاب و نمونه برداري گرديد. نمونه ها كشت شده و با روش PCR مورد آزمايش قرار گرفتند و محصول PCR روي ژل آگارز 8/0 درصد الكتروفورز شد. نتايج: از 121 نمونه عسل جمع آوري شده از زنبورستان هاي استان تهران، از31 نمونه عسل پني باسيلوس لاروا لاروا جدا سازي و با روش PCR تاييد نهايي گرديد. بنا بر اين ميزان شيوع آلودگي در زنبورستان هاي استان تهران 6/25 % مي باشد. با توجه به امكان الودگي فراورده هاي زنبور عسل به اين اسپورها و حساسيت ان در تجارت جهاني و تاثير كاملا منفي ان بر روي صادرات، مونيتورينگ و شناسايي اين اسپورها در عسل ها بسيار ضروري مي باشد.

American foulbrood (AFB), a severe bacterial disease of honeybee brood, caused by the sporeforming bacterium Paenibacillus larvae subspecies larvae. The agent, infect and kill larvae and produce billions of resistant spores to environmental factors. The spores are distributed in bee colonies and apiaries, thus bee products (honey…) are contaminated. For diagnosis, culture and chemical tests are very timeconsuming and expensive which occasionally give false result. In this study, 121 samples of honey were collected from apiaries in Tehran province. The samples were selected by simple random method. Honey samples were diluted with an equal volume of distilled water and centrifuged, then the pellet used for DNA extraction. DNA was used for culture and PCR. PCR products were electrophoresed on 0.8 % agarose gel. The result showed that out of 121 honey samples which collected from beekeeping of Tehran province, 31(25/6 %) samples were positive by culture and PCR. To control and preventive measures before the occurrence of any kind of damages, we can monitor or screen of honey samples on regional and national scale by using culture and PCR method. According to the possibility of Honey contamination with the spores and its importance in global trade and a clear negative impact on exports, monitoring and detection of spores in honeys is very essential.