جداسازي سلول‏هاي بنيادي فوليكول مو CD34 مثبت با استفاده از سيستم جداسازي سلولي در ميدان آهن ربايي

Isolation of CD34 Positive Hair Follicle Stem Cells Using Magnetic Activating Cell Sorting (MACS) Method

زمينه و هدف: سلول ‏هاي بنيادي فوليكول مو چند توان هستند و چندين نوع سلول بنيادي در ناحيه بالج فوليكول مو شناسايي شده است. جداسازي دقيق سلول ‏هاي بنيادي فوليكول مو با استفاده از ماركرهاي سطحي يكي از روش ‏هاي مناسب جهت جايگزيني روش ‏هاي جداسازي قديمي محسوب مي ‏شود. در اين مطالعه از روش جداسازي سلول در ميدان آهنربايي براي جداسازي سلول‏ هاي بنيادي فوليكول مو استفاده شده است. روش كار: در اين مطالعه فوليكول موي سبيل موش سوري نژاد Balb/c در زير ميكروسكوپ معكوس تشريح شد و نواحي حاوي سلول‏ هاي بنيادي فوليكول مو (بالج) جدا شد و نواحي بالج به مدت 14 روز كشت داده شدند. سلول‏هاي CD34 مثبت با روش جداسازي سلول در ميدان آهنربايي و توسط آنتي بادي مونوكلونال CD34 متصل به ميكروبيد جداسازي شدند و در محيط كشت DMEM/F12 حاوي 10% سرم گاوي كشت داده شدند و تعداد سلول ‏هاي CD34 با استفاده از لام نيوبار شمارش شدند و در زير ميكروسكوپ فلوروسنت سلول ‏هاي CD34 مثبت مشاهده شدند. يافته ها: نتايج اين مطالعه نشان داد كه جداسازي سلول ‏هاي بنيادي CD34 مثبت با روش مكس (MACS) موفقيت‏آميز بوده و 04/1±12 درصد سلول‏ هاي CD34 مثبت بودند و اين سلول‏ ها بعد از يك هفته كشت در محيط كشت زنده ماندند. نتيجه گيري: يافته اين مطالعه نشان داد كه روش جداسازي سلولي در ميدان آهنربايي باعث افزايش تراكم سلول ‏هاي بنيادي فوليكول مو در محيط كشت مي ‏شود.

Background & objectives: Hair follicle stem cells (HFSCs) are multipotent and various types of HFSCs were introduced. HFSCs separation using cell surface markers is one of the interesting strategies in the replacement of old methods. In this study, we used magnetic activating cell sorting (MACS) to separate HFSCs. Methods: In this study, HFSCs were isolated from Balb/c mice and dissected under an invert microscopy, and bulge area isolated and the bulge cells cultivated about 14 days. The CD34 positive cells isolated using CD34 monoclonal antibody and magnetic activated cell sorting system (MACS), then the cells incubated in DMEM/F12 and 10% FBS. The CD34 positive cells counted using a neubauer slide and evaluated under a fluorescent microscopy. Results: Here, we isolated CD34 positive cells using MACS and 12±1. 04% of HFSCs were CD34 positive and we found that, CD34 positive cells survived during 7 days cell culture in vitro. Conclusion: The results show that MACS is useful to increasing density gradient of cells in vitro. Keywords: Hair Follicle Stem Cells, Magnetic Activating Cell Sorting, CD34, Fluorescent Microscopy.