بررسي ايمني زايي كونژوگه OPS، يرسينيا انتروكوليتيكا8:O با توكسوييد ديفتري به عنوان نامزد واكسن در موش

Evaluation of Immunogenicity of Yersinia enterocolitica O:8 Oligopolysaccaride-DiphtheriaeToxoide Conjugate in Mice

زمينه و هدف: بيماري يرسينيوز توسط باكتري يرسينيا انتروكوليتيكا8:O به وجود مي ‏آيد. اين بيماري باعث بروز مشكلاتي در بيش‌تر كشورهاي جهان از جمله كشورهاي سرد و معتدل مي‏ گردد. هدف از اين مطالعه، بررسي ايمني‏ زايي كونژوگه OPS، يرسينيا انتروكوليتيكا8:O با توكسوييد ديفتري (DT)، به عنوان نامزد تهيه واكسن OPS-DT)) بود. روش كار: بعد از كشت انبوه باكتري، LPS با فنل داغ اصلاح شده، جدا گرديد. OPS نيز بعد از دياليز و تغليظ با اسيد استيك 2% جدا گرديد. براي كونژوگه كردن با توكسوييد ديفتري، ADH به عنوان مولكول فاصله‏ گذار و EDAC به عنوان اتصال‏ دهنده استفاده شد. هم‌چنين تخليص كونژوگه با عبور از ژل فيلتراسيون صورت گرفت. سپس چهار گروه 15 تايي از موش ‏هاي BALB/c ماده انتخاب شد. تزريق به صورت سه دوز تزريقي داخل صفاقي IP در فواصل دو هفته ‌اي انجام گرفت، سپس نمونه سرم گردآوري شد. پاسخ آنتي بادي عليه يرسينيا انتروكوليتيكا8:O به ‌‌وسيله روش الايزاي غيرمستقيم براي تعيين ميزان آنتي بادي‌ ها انجام گرديد. يافته‌ها: بعد از دومين و سومين دوز تزريق، گروه‌ هاي واكسينه شده با OPS-DT افزايش چشمگيري در ميزان تيتر تمام آنتي بادي‌ ها عليه OPS در مقايسه با OPS غيركونژوگه نشان دادند، اين افزايش تيتر در تمام آنتي بادي‌ ها، به اين ترتيب بود: OPS-DT > OPS > DT. افزايش قابل ملاحظه ‌اي در تيتر IgM و IgG مشاهده شد كه مقدار آن‏ها به ترتيب با670 و 3204 برابر بود. در زير كلاس IgG1 به مقدار 920 و در IgG2a، IgG2b و IgG3 به ترتيب 110،99 و910 مشاهده شد. نتيجه‌گيري: نتايج حاصل از اين تحقيق نشان داد كه OPS يرسينيا انتروكوليتيكا8:O آنتي بادي ضد OPS)) را در فرم كونژوگه با توكسوييد ديفتري افزايش داده و مي‌تواند نامزد تهيه واكسني مناسب به شمار آيد.

Background & objectives: Yersiniosis is created by Yersinia enterocolitica O:8 and causes problems in the world especialy in cold and mild countries. The purpose of this study is to evaluate the immunogenicity of Yersinia enterocolitica O:8 oligopolysaccaride (OPS) conjugate to diphtheria toxoid (DT) as a vaccine candidate. Methods: After cultivation of bacteria, the LPS were isolated by modified hot phenol method. Then dialysis and concentration were done and the OPS were extracted by acetic acid 2%. To conjugate with diphtheria toxoid, ADH was used as a spacer molecule and EDAC as a linker. Conjugate was purified by gel filtration. Then 4 groups of female BALB/c mice were selected (15 mice in each group). Injection was performed intraperitoneally in three doses with two weeks interval. Then serum samples were collected and antibody response against OPS was measured by indirect ELISA method for detection of total IgG, IgA, IgM, IgG1, IgG2a, IgG2b and IgG3. Results: After second and third doses, OPS-DT recieved group showed significant increase in all types of antibodies titer in anti-OPS in comparison to group that recived nonconjugated OPS. The increase in titer of antibodies was as: OPS-DT > OPS > DT. A remarkable increase was shown in total IgG and IgM titers (with total amount of 3204 and 670, respectively). In IgG1 subclass the amount was 920 and in other subclasses of IgG (IgG3, IgG2a and IgG2b) the amounts were 910, 110, and 99, respectively. Conclusion: The results shows that OPS of Yersinia enterocolitica O:8 increases the anti-OPS antibodies in the form of conjugate with diphtheria toxoid and could be considered as an appropriate vaccine candidate. Keywords: Yersinia enterocolitica O:8, OPS, Conjugate Vaccine, Diphtheria Toxoid.