تشخيص همزمان سل ريوي و تعيين مقاومت دارويي به ايزونيازيد در سويه‌هاي كلينيكي مايكوباكتريوم توبركلوزيس با استفاده از روش PCR-RFLP

Simultaneous detection of TB and drug resistance to Isoniazid in Mycobacterium tuberculosis clinical isolates using PCR-RFLP method

زمينه: تشخيص سريع و درمان دارويي مناسب اولين اقدام براي كنترل اپيدمي سل و سل مقاوم به دارو است. در مطالعه حاضر روش مولكولي PCR-RFLP جهت تشخيص سريع سويه‌هاي كلينيكي و تعيين مقاومت آن به ايزونيازيد مورد استفاده قرار گرفت. مواد و روش‌ها: در مطالعه حاضر تعداد 87 نمونه كلينيكي مايكوباكتريوم توبركلوزيس مورد بررسي قرار گرفت. ابتدا با كمك PCR جستجو و تكثير ژن katG قطعه bp620 براي تاييد مولكولي در تشخيص باكتري صورت گرفت. سپس محصول PCR با كمك RFLP و با استفاده از آنزيم مناسب برش داده شده و الگوهاي به‌دست آمده در الكتروفورز، به منظور تشخيص موتاسيون در 315 katG مورد بررسي قرار گرفت. جهت تاييد نهايي، تعدادي از نمونه‌ها تعيين توالي شدند. يافته‌ها: در مطالعه حاضر تمامي سويه‌هاي مورد مطالعه باند bp620 را نشان دادند كه مويد مايكوباكتريوم توبركلوزيس بود. علاوه‌بر اين، از 46 سويه مقاوم به ايزونيازيد، در روش RFLP-PCR نشان داده شد كه 44 سويه داراي موتاسيون در Ser315Thr ژن katG بودند. از 41 سويه حساس هيچ كدام در كدون 315 katG موتاسيون نداشتند. از طرفي نتايج تعيين توالي، تاييد كننده‌ي تعيين موتاسيون به‌روش مولكولي مورد استفاده بود. در اين تحقيق براي تست RFLP-PCR حساسيت 6/95 درصد (98/0-85/0:CI 95 درصد) و ويژگي 100 درصد (1/0-91/0:CI 95 درصد) محاسبه گرديد. نتيجه‌گيري: نتايج مطالعه حاضر نشان مي‌دهد كه روش PCR-RFLP قادر به شناسايي مقاومت به ايزونيازيد در 95 درصد موارد بوده و مي‌تواند در يك آزمايش به‌صورت همزمان جهت تشخيص سل ريوي و تعيين مقاومت دارويي به ايزونيازيد در سويه‌هاي كلينيكي مايكوباكتريوم توبركلوزيس مورد استفاده قرار گيرد.

Background: Early detection and suitable drug admission are the first attempts to control of TB and MDR-TB. In this study, PCR-RFLP method was used for rapid detection of Mycobacterium tuberculosis and resistance to isoniazid. Materials and Methods: In the present study, 87clinical isolates of MTB were used in a PCR-RFLP method. The RFLP-PCR assay by specific primer was used for two purposes; In the first, PCR of katG gene for diagnosis of bacteria and in the second step, PCR product by endonuclease enzyme in a RFLP reaction produced a pattern in electrophoresis for mutation detection in katG315. Sequencing method was used for confirmation of RFLP results. Results: The study showed that all studied strains produced band 620bp that confirmed MTB. From the 46 resistant strains to isoniazid, the RFLP-PCR method showed that 44 strains had mutations in the katG gene Ser315Thr. The 41 susceptible strains had not any mutation at the codon. Results of sequencing were confirmed results of the molecular method. Sensitivity of RFLP-PCR test was 95.6% (95% CI :0.85-0 .98) and specificity was 100% (95% CI :0.91-1 .0). Conclusion: RFLP-PCR test is a good tool for simultaneous diagnosis and detection of katG315 mutation in clinical isolates of MTB.