ارتباط ژن OCT4B1و آپوپتوزيس در رده هاي سلول سرطاني

The Correlation between OCT4B1 and Apoptosis in Human Cancer Cell Lines

سابقه و هدف: OCT4B1 يكي از واريانت هاي ژن OCT4 است كه به ميزان بالايي در رده هاي سلول سرطاني و نيز بافت هاي سرطاني بيان مي شود. مطالعات اخير نشان داده اند كه اين واريانت قدرت آنتي آپوپتوتيكي دارد. هدف از اين مطالعه بررسي تاثير مهار اين واريانت بر الگوي بياني ژنهاي خانواده آنتي آپوپتوزيس در سه رده سلول سرطاني انسان مي باشد. مواد و روشها: در اين مطالعه آزمايشگاهي سه رده سلول سرطاني، AGS، 5637 و U87MG از بانك سلولي انستيتو پاستور ايران خريداري و پس از كشت در دو گروه تست و كنترل با استفاده از تكنولوژي siRNA و روش ليپوفكشن به منظور مهار واريانت OCT4B1، مورد ترانسفكشن قرار گرفتند. پس از تاييد مهار ژني، تخليص RNA و سنتز cDNA انجام شد و نهايتا بيان ژنهاي مورد نظر با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي و روش Real-Time PCR، تعيين و ميزان بيان هر ژن (با مقايسه گروههاي تست و كنترل) تعيين گرديد. يافته‌ها: نتايج نشان داد الگوي تغييرات بيان ژني در سه رده سلول سرطاني مورد مطالعه تقريبا مشابه است و ژنهاي BCL2، BRAF وBFAR به ترتيب با 87/20، 33/18 و 11/15 برابر بيشترين كاهش بيان را داشته اند. در كل بيان 20 ژن از 26 ژن مورد بررسي كاهش و چهار ژن CASP2، IGF1R ،TNF و MCL1 افزايش بيان جزيي يا بيان بدون تغيير داشته اند. بيان ژن CFLAR در رده سلول سرطاني U87MG، افزايش بيان اما در دو رده سلول سرطاني ديگر كاهش بيان جزيي را نشان داد. نتيجه گيري: طبق نتايج بدست آمده احتمالا مهار OCT4B1 با ممانعت از بيان ژنهاي خانواده آنتي آپوپتوزيس موجب كمك به القا مرگ برنامه ريزي شده در رده هاي سلول سرطاني مي شود.

BACKGROUND AND OBJECTIVE: OCT4B1, as one of the variants of OCT4 gene, is expressed at higher levels in cancer tissues and cancer cell lines, compared to other OCT4 variants. Recent studies have revealed the anti-apoptotic role of OCT4B1. The aim of this study was to evaluate the effect of OCT4B1 suppression on the expression profile of anti-apoptotic genes in three human tumor cell lines. METHODS: In this in-vitro study, three human tumor cell lines including AGS (stomach adenocarcinoma), 5637 (bladder cancer), and U87MG (brain tumor) were purchased from the National Cell Bank of Iran (Pasteur Institute) and cultured in test and control groups. In order to suppress OCT4B1 expression, the cultures were transfected, using siRNA technology and lipofection method. After confirming the suppression process, total RNA was extracted and cDNA was synthesized. Finally, the expression rates of anti-apoptotic genes were determined, using specific primers and real-time PCR technique. FINDINGS: Our data revealed an almost similar pattern of alteration in the expression profile of anti-apoptotic genes in all three cell lines. Also, BCL2, BRAF, and BFAR genes exhibited the most significant down-regulation by 20.87, 18.33, and 15.11 folds, respectively. The expression of at least 20 genes (out of 26 genes) decreased, while the expression rates of CASP2, IGF1R, TNF, and MCL1 were up-regulated or remained unchanged. Also, the expression of CFLAR gene was up-regulated in U87MG and down-regulated in other cell lines (5637 and AGS). CONCLUSION: Based on our findings, OCT4B1 suppression by blocking the expression of anti-apoptotic genes may result in the induction of apoptosis in cancer cell lines. KEY WORDS: Anti-apoptotic Gene Family, Cancer Cell Lines, OCT4B1.