بررسي كارايي عملكرد آنتي‌ژن‌نوتركيب ROP1 در تشخيص عفونت توكسوپلاسما گوندي

Evaluating Recombinant Antigen ROP1 Efficacy in Diagnosis of Toxoplasma Gondii Infection

مقدمه:توكسوپلاسمايك انگل داخل سلولی اجباری است كه دارای دامنه ميزبان وسيعی در ميان پستانداران و پرندگان است، پروتئين‌های توكسوپلاسما آنتی‌ژن‌های قوی می‌باشند كه قادرند واكنش‌های ايمنی قوی را شروع كنند.يكی از اين نوع راپتری پروتئين 1 توكسوپلاسما گونديی(ROP1) است.ROP1 يكی از رقابت كننده‌های واكسن‌های نوتركيب بر عليه توكسوپلاسما می‌باشد. بنابراين هدف از اين مطالعه كلونينگ و بيان ROP1 در يك كلونينگ وكتور((PUET1 و ساخت اين آنتی‌ژن نوتركيب برای استفاده‌های بعدی است. روش بررسی:پس از استخراج DNA و تكثير با روش PCR محصول در كلونينگ وكتورPUET1 در مكان آنزيم‌های محدودكننده BamH1 و EcoR1كلون شد و به داخل سلول ميزبان BL21plsS انتقال يافت. همچنين جهت ايجادوكتور يوكاريوتی،pcROP1 در pcDNA3 در مكان‌های Hind111 و ٍEcoR1 ساب كلون شد و نتايج با هضم آنزيمی و توالی يابی بررسی شد. حال اين آنتی‌ژن‌نوتركيب با IgM و IgGELISA پوشانده شد. نتايج:يك قطعه 757 جفت‌بازی جداسازی شد و آناليز توالی يك همولوژی در حد 96 درصد را با توالی ژن در سايت No. M71274.)Gene Bank)نشان داد.نتايج الايزا نشان داد IgMELISA ROP1 با بيشترين تعداد نمونه‌های IgM مثبت واكنش می‌دهد. نتيجه‌گيری:آنتی‌ژن‌نوتركيب ROP1 در يك تست IgM Rec-ELISA می‌تواند جايگزين آنتی‌ژن تاكی زوئيت در تست‌های سرولوژيكی IgM و IgG شود.

Introduction:Toxoplasma gondii is a ubiquitous obligate intracellular parasite with a relatively broad host range infecting both mammals and birds. Toxoplasma proteins are strong antigens that can begin strong immune reactions, among which Rhoptry protein 1 (ROP1) can be named discharging from rhoptry cell-organ. ROP1 is regarded as a competitor for recombinant vaccines against toxoplasmosis. Therefore, the main objective of the current study was to evaluate the cloning and expression of ROP1 Toxoplasma gondii in a cloning vector as well as to create this recombinant antigen in order to be applied for later uses. Methods:Genomic DNA of Toxoplasma gondii was removed and reproduced by PCR, then the PCR product was cloned into the EcoR1 and BamH1 sites of cloning vector, pUET1, and transformed into Escherichia coli BL21 plysS strain. Moreover, pcROP1 was sub-cloned into the HindIII and EcoRI sites of the pcDNA3 in order to produce recombining eukaryotic declaration vector. The cloned ROP1 was verified by PCR, limitation enzymes (HindIII and BglΙ) digestion and nucleotide sequencing. Then, this recombinant antigen was covered applying IgM and ELISAIgG. Results:The study results demonstrated that a fragment of 757 bp was separated. In addition, nucleotide sequence analysis of the ROP1 cloned in pUET1vector revealed high homology (96%) with RH strain Gene Bank Accession (No. M71274). Conclusion:The recombinant ROP1 antigen in an IgM Rec-ELISA test can be replaced with the tachyzoite antigen in IgG and IgM serologic tests.