جداسازي لاكتوباسيلوس پلانتاروم از ارقام مختلف زيتون بومي ايران و بررسي فعاليت ضد ميكروبي آن بر دو باكتري بيماري‏زاي خانواده انتروباكترياسه

Isolation of Lactobacillus plantarum from different varieties of Iranian native olives and investigation of their antimicrobial activity against two pathogenic members of Entrobacteriaceae

مقدمه: درمان با كمك ميكروارگانيسم‏ها روشی نوين و در حال توسعه است كه در اين زمينه باكتري‏های پروبيوتيك به ويژه باكتري‏های اسيدلاكتيك نقش اساسی دارند. زيتون از گياهان پربار و مفيد بومی ايران و سرشار از باكتري‏های اسيد‏لاكتيك است. در اين مطالعه، تعدادی از سويه‏های لاكتوباسيلوس پلانتاروم از ارقام مختلف زيتون بومی ايران جدا و برخی خواص پروبيوتيكي آن‏ها بررسی شد‏‏. مواد و روش‏‏ها: ابتدا سويه‏های مختلف باكتري‏هاي اسيد‏لاكتيك از سه رقم زيتون بومی ايران بر روی محيط كشت MRS آگار جداسازی شد و پس از شناسايي‏های بيوشيميايی و مولكولی، برخی خواص پروبيوتيكي شامل: مقاومت به اسيد، صفرا و آثار ضد‏ميكروبی جدايه‏های لاكتوباسيلوس پلانتاروم در برابر دو عضو بيماري‏زای خانواده انتروباكترياسه شامل: اشريشيا كلی (PTCC1399) و شيگلا ديسانتری (PTCC1188) با استفاده از دو روش انتشار از چاهك و ديسك بررسی شد. به منظور كاهش خطا، هر آزمون سه بار تكرار شد. ميانگين قطر هاله عدم رشد توسط سويه‏های مختلف جدا شده از طريق آزمون تحليل واريانس يك‏طرفه مقايسه شد. نتايج: از بين 28 سويه جداسازی شده، بر اساس نتايج آزمون‏های بيوشيميايی، 57 درصد سويه‏ها لاكتوباسيلوس پلانتاروم شناسايی شدند. در بين اين سويه‏ها، 75 درصد سويه‏ها در برابر شرايط اسيدی و 25/81 درصد در برابر نمك‏های صفراوی، مقاوم يا بسيارمقاوم بودند. در بررسي‏هاي مولكولی، در واكنش PCR، 6 سويه با آغازگرهاي اختصاصی طراحی شده برای لاكتوباسيلوس پلانتاروم باند اختصاصی تشكيل دادند. نتايج، توصيف كننده آثار ضد ميكروبی لاكتوباسيلوس پلانتاروم جدا شده از ارقام مختلف زيتون بومی ايران بر روي دو پاتوژن روده‏ای اشريشيا كلی و شيگلا ديسانتری بودند. بحث و نتيجه‏گيری: با توجه به وجود خواص پروبيوتيكی در سويه‏های لاكتوباسيلوس پلانتاروم جدا شده از زيتون‏های بومی ايران، استفاده از آن‏ها برای پيشگيری و درمان عفونت‏های شيگلا ديسانتری و اشريشيا كلی به‏عنوان راهكاری مهم و عملی قابل قبول است.

Introduction: Treatment with microorganisms is a new developing method that in this field, probiotic bacteria, especially lactic acid bacteria have a significant role. Olive is a productive and useful Iranian native plant which is rich in lactic acid bacteria. In this study, a number of Lactobacillus plantarum strains were isolated from Iranian native olives and some of their probiotic properties were investigated. Materials and methods: At first, different strains of lactic acid bacteria were isolated from Iranian native olive on MRS agar medium, and after biochemical and molecular identification of bacteria, some probiotic properties such as acid and bile salt tolerance; and antimicrobial effects against two pathogenic species of Enterobacteriaceae, Escherichia coli (PTCC1399) and Shigella dysenteriae (PTCC1188) were studied by disk and well diffusion agar methods. According to error reduction, each test was performed in triplicate. Average zone of inhibition for each strain was compared by one-way ANOVA. Results: According to biochemical tests, 57 percent of 28 isolated lactic acid bacteria were identified as Lactobacillus plantarum. Among these strains, 75 percent and 81.5 percent were acid and bile tolerance respectively. In the molecular analysis, 6 strains were shown specific bands in PCR reaction which performed by specific primers designed for Lactobacillus plantarum. The results described antimicrobial effects of Lactobacillus plantarum isolated from Iranian native olives on two enteric pathogens, Escherichia coli and Shigella dysenteriae. Discussion and conclusion: According to probiotic properties of isolated Lactobacillus plantarum from Iranian native olives, using them is acceptable as an important and practical approach to prevent infectious disease and its treatment due to Escherichia coli and Shigella dysenteriae.