بررسي تاثير عصاره هيدروالكلي پوست انار بر روي تشكيل بيوفيلم حاصله از باكتري سودوموناس آيروجينوزا

Study on Hydro-Alcoholic Extract Effect of Pomegranate Peel on Pseudomonas aeruginosa Biofilm Formation

مقدمه و هدف: ميكروارگانيسم ها مي توانند در اثر عوامل مختلف به دور يكديگر جمع شده و تشكيل توده زيستي به نام بيوفيلم را دهند كه باعث افزايش مقاومت آنها نسبت به شرايط نامساعد محيطي و بيوسايدها مي شود. از استراتژي هاي مقابله با بيوفيلم استفاده از تركيبات مختلف گياهي است. ثابت شده كه عصاره گياهاني همچون انار، تمشك و اسانس بابونه داراي اثر ضدبيوفيلمي مي باشند. اين مطالعه با هدف تعيين اثر غلظت هاي مختلف عصاره پوست انار بر روي تشكيل بيوفيلم باكتري سودوموناس آيروجينوزا انجام گرفت. روش كار: در اين مطالعه تجربي ميزان اثر ضد بيوفيلمي، ميزان درصد كاهش تشكيل بيوفيلم و كينتيك رشد باكتري سودوموناس آيروجينوزا در تيمارهاي مختلف به روش ميكروتيتر پليت و رنگ سنجي با كريستال ويوله اندازه گيري شد. همچنين ميزان تشكيل بيوفيلم به روش ميكروسكوپي نيز مورد بررسي قرار گرفت. تجزيه و تحليل آماري داده هاي بدست آمده حاصل از قرايت دستگاه الايزا با نرم افزار SPSS در سطح 05/0 انجام شد. نتايج: يافته ها نشان داد كه در تمامي تيمارها در شش ساعت اول باكتري قادر به توليد بيوفيلم نبوده است. ميزان بيوفيلم تشكيل شده در تيمار 12 ساعت غلظت هاي g/mL 01/0و 05/0 متوسط بود. در تيمارهاي 18 و 24 ساعته غلظت g/mL 001/0 عصاره پوست انار به ترتيب تاثير بازدارندگي تشكيل بيوفيلم متوسط و قوي مشاهده شد. نتيجه نهايي: نتايج اين مطالعه نشان داد كه مدت زمان در معرض قرار گرفتن باكتري ها با تشكيل بيوفيلم و درصد كاهش تشكيل بيوفيلم رابطه مستقيمي دارد كه مي تواند ناشي از فازهاي متفاوت رشدي باشد. مطالعه كينتيك رشدي نيز مشخص كرد كه در اكثريت تيمارها تا زمان حدود 15 ساعت رشد افزايشي و پس از آن به دليل تاثيرگذاري تيمارهاي متفاوت به صورت كاهشي بوده است. تيمارها پس از 18 ساعت بيشترين تاثير را در تشكيل بيوفيلم داشته اند. در همين راستا نتايج درصد كاهش تشكيل بيوفيلم نيز نشان داد كه در 18 ساعت بيشترين كاهش رخ داده است. نتايج اسلايدهاي ميكروسكوپي نيز كاملا تاييد كننده موارد فوق بوده است.

Introduction & Objective: Microorganisms form biomass as biofilm in response to many factors, in order to adapt to hostile extracellular environments and biocides. Using different herbal compounds are of those strategies to deal with biofilm. It has been proved that plants extracts such as pomegranate, raspberry and chamomile essential oils have anti-biofilm effects. This study aimed to evaluate the effect of different concentrations of black peel pomegranate ex-tract on Pseudomonas aeruginosa biofilm formation. Materials & Methods: In this experimental research the anti-biofilm effect, reducing the amount of biofilm formation and growth kinetics of Pseudomonas aeruginosa in different treatments was measured by microtiter and plate colorimetric crystal violet method. Biofilm formation was also examined using a microscope. Statistical analysis of data obtained from the reading of the ELISA was performed using SPSS software, P value 0.05. Results: Findings of this study showed that bacteria cannot form any biofilm in first 6 hours of incubation, in all treatments. The amount of biofilm formation after 12 hours in 0.01 and 0.05 g/ mL treatments were medium. Among treatments, after 18 and 24 hours of incubation 0.001 g/ mL concentration of pomegranate peel extract had medium and strong inhibitory effect on biofilm formation, respectively. Conclusion: Results of this study showed that biofilm formation and biofilm reduction percent-age is directly related to the duration of exposure of bacteria that could be due to the different phases of growth. Growth kinetics study also revealed that in the majority of treatments the growth was incremental up to about 15 hours and decrement afterwards due to the effective-ness of different treatments. After 18 hours, treatments have greatest influence on biofilm formation. The foregoing has been fully confirmed by the results of microscopic slides. (Sci J Hamadan Univ Med Sci 2015; 22 (3): 195-202)