مقايسه دو روش تزريق داخل پوستي و داخل وريدي توليد هموليزين ضد گوسفندي در خرگوش آزمايشگاهي

Comparison of intradermal and intravenous injection methods for laboratory rabbit anti-sheep hemolysin production

دستورالعمل های زیادی جهت تولید همولیزین وجود دارد ولی برای تولید آزمایشگاهی همولیزین با تیتر های بالاتر، استاندارد كردن روش ها، ضروری می باشد. در این تحقیق، برای اولین بار در كشور، همولیزین بوسیله تزریق خون كامل گوسفند به طریق داخل پوستی در خرگوش آزمایشگاهی تولید و با روش متداول كه تزریق داخل وریدی گلبول های قرمز شسته شده گوسفند به میزان 2% می باشد مقایسه گردید. همولیزین های  تهیه شده بوسیله روش كلمر مورد تیتراسیون قرار گرفتند. تیتر بدست آمده در روش تزریق داخل پوستی، حداقل 9600 : 1 بود، در حالیكه در روش تزریق داخل وریدی میزان 1200 : 1 تعیین گردید. نتایج حاصل در3 تكرار بعمل آمده در مورد دو روش ذكر شده عیناً مانند قبل بود. جهت بررسی زمان پایداری، فرآورده های تولید شده را بصورت لیوفیلیزه در آورده و در درجه حرارت 20- قرار داده شدند و به فواصل هر شش ماه یك بار و بمدت 2 سال  مجدداً مورد تیتراسیون قرار گرفتند. جهت بررسی فعالیت آزمایشگاهی نیز، از آنها در تست های سرولوژیك استفاده گردید. در این بررسی، همولیزین تهیه شده در روش تزریق داخل پوستی خون كامل گوسفند در تمام موارد و حتی بعد از 2 سال از تاریخ تولید، هیچگونه كاهش تیتر نداشته و در تست های سرولوژیك نتایج بسیار مطلوب داشت ولی محصول تهیه شده در روش تزریق داخل وریدی كاهش شدید تیتر نشان داده و در تست های سرولوژیك  نتایج قابل قبولی از آن بدست نیامد. با توجه به نتایج بدست آمده، تزریق خون كامل، به روش داخل پوستی و بر طبق دستورالعمل ارائه شده در این تحقیق می تواند جایگزینی مناسب برای روش متداول تزریق داخل وریدی به منظور تولید همولیزین ضد گوسفندی خرگوشی با تیتر و زمان پایداری و نحوه اثر بسیار بالاتر باشد. 

There are many guidelines for hemolysin production, but for production with higher titers, standardization of procedures is essential. In this study, for the first time in the country, the hemolysin was produced by whole  sheep blood intradermal injection to laboratory rabbits and was compared with the intravenous injection of 2% washed sheep red blood cells routine method. The produced hemolysins were titerd by kolmer method. In whole blood intradermal  injection method, the rabbit anti-sheep hemolysin titer was at least 1:9600 whereas in 2% washed cells intravenous injection method, obtained 1:1200. The obtained results of the three replicates were taken on two methods listed were exactly the same as before. In order to increasing the products stability, they was lyophilized and were  kept in -20oC. For survey in maintained products stability time, once every six months for 2 years, both the products, were tittered. To evaluate the in vitro activity, they were used in serological tests. In this survey, the  hemolysin produced by whole  sheep blood intradermal injection, in all cases, and even after 2 years of production, there is no reduction in titer and it was very favorable in serologic tests, but the product was prepared by intravenous injection, showed sharp decline in titer and it  was not an acceptable result in serologic tests. According to the results, the whole blood intradermal method occording to this protocol can be replaced to routingly 2% washed cells intravenous injection for production of  anti-sheep hemolysin with high titer, stability and effect.