جداسازي و تعيين خصوصيات ميكرووزيكول‌هاي جدا شده از سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي جفت

Isolation and characterization of Placenta- MSC derived microvesicles

چكيده سابقه و هدف سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي(MSC) از طريق ترشح فاكتورهاي محلول، تماس سلول با سلول و غيره، عملكرد بنيادي سلول‌هاي بنيادي خونساز(HSC) را حفظ مي كنند. به تازگي مشخص شده است كه MSC قطعات غشايي به نام ميكرووزيكول و يا ميكروپارتيكل را توليد مي‌كند كه در انتقال پيام آن نقش دارد. مواد و روش‌ها در اين مطالعه تجربي، از 3 عدد جفت كه تحت شرايط استريل به دست آمده بودند، استفاده شد. سلول-هاي مزانشيمي و سپس ميكرووزيكول هاي آن ها توسط اولترا سانتريفوژ در دور g 100.000 جدا گرديد. غلظت ميكرووزيكول ها در 2 نمونه، با روش بردفورد تعيين و خصوصيات آن ها توسط فلوسيتومتري و ميكروسكوپ الكتروني تعيين شد. يافته‌ها سلول هاي مزانشيمي جفت در روز 14 پس از جداسازي به پاساژ اول رسيدند كه در مقايسه با سلول هاي مزانشيمي مغز استخوان زمان بيشتري براي رشد اوليه شان، لازم بود. ميكرووزيكول ها داراي اندازه‌هاي متفاوت، حدود 40 تا 160 نانومتر بودند. ميانگين غلظت آن‌ها µg/mL 125 بود(حداقل غلظت µg/mL 100 و حداكثر µg/mL 150) و شاخص هاي CD44 ، CD29 ، CD73 و CD105 را بر سطح خود بيان مي كردند. نتيجه گيري ميكرووزيكول ها، ماركرهاي سلول مزانشيمي را كه براي چسبندگي به سلول هاي ديگر لازم است، بيان مي‌كنند و بنابراين مي توانند در اعمال اثرات سلول مزانشيمي در كشت هاي مختلف از جمله هم كشتي با سلول بنيادي خونساز نقش داشته باشند.

Abstract Background and Objectives Mesenchymal stem cells (MSCs) are the key elements of bone marrow and facilitate HSC maintenance in an in vitro co-culture system through the secretion of soluble factors and cell-cell contact. Cell-derived microvesicles (MVs) or microparticles have been described as a new mechanism of cell to cell communication. Materials and Methods In this experimental study, we obtained three placenta tissues from mothers with the informed consent under sterile condition. MSCs were isolated from the placentas; after several passages, MVs were obtained from MSC-culture-conditioned media by ultracentrifugation. Thje MVs concentration was determined in two samples by Bradford method; then, we characterized them by Transmission Electron microscopy and flowcytometer. Results At day 14 of the isolation, placenta-MSCs were passaged with more time for their growth required compared to BM-MSC. A different size range of microvesicles, within 40 to 160nm, was observed. The mean concentration was 125µg/mL (minimum 100µg/mL and maximum 150µg/mL) and they expressed CD29, CD44, CD73, and CD105 on their surface such as BM-MSC derived microvesicles. Conclusions Microvesicles express mesenchymal cell markers that are required for adhesion to other cells. So they can contribute to the effects of mesenchymal stem cells in various cultures such as co-culture with hematopoetic stem cells.