عنوان مقاله :
چگونگي تكوين سلول‌هاي شبكيه از طريق انتقال ژن PAX6 به سلول‌هاي CD133+ به دست آمده از بند ناف انسان
عنوان فرعي :
Retinal cells development through transfection of CD133+ HSC derived from human cord blood by PAX6 master gene
پديد آورندگان :
بالاقلي، سحر نويسنده كارشناس ارشد خون‌شناسي ـ مركز تحقيقات انتقال خون ـ موسسه عالي آموزشي و پژوهشي طب انتقال خون و پايگاه منطقه‌اي آموزشي انتقال خون تهران ـ تهران ـ ايران Balagholi, .S , اميني كافي‌آباد، صديقه نويسنده متخصص آسيب‌شناسي باليني و تشريحي ـ دانشيار مركز تحقيقات انتقال خون ـ موسسه عالي آموزشي و پژوهشي طب انتقال خون ـ تهران ـ ايران ـ صندوق پستي: 1157-14665 Amini Kafi-Abad, .S , سهيلي، زهرا سهيلا نويسنده PhD بيوشيمي ـ استاديار پژوهشگاه ملي مهندسي ژنتيك و تكنولوژي زيستي ـ تهران ـ ايران Soheili, .Z.S , سميعي، شهرام نويسنده , , احمديه، حميد نويسنده دانشگاه علوم پزشكي شهيد بهشتي AHMADIEH, H. , رضايي كنوي، مژگان نويسنده فوق تخصص شبكيه ـ دانشيار مركز تحقيقات چشم دانشگاه علوم پزشكي شهيد بهشتي ـ تهران ـ ايران Rezaie Kanavi, .M , نيكوگفتار ظريف، مهين نويسنده PhD هماتولوژي و بانك خون ـ مركز تحقيقات انتقال خون ـ موسسه عالي آموزشي و پژوهشي طب انتقال خون ـ تهران ـ ايران Nikougoftar Zarif, .M , دفتريان، نارسيس نويسنده دانشگاه علوم پزشكي شهيد بهشتي ,
اطلاعات موجودي :
فصلنامه سال 1394 شماره 49
كليدواژه :
CD133 antigen , PAX6 protein , cord blood , آنتي‌ژن CD133 , پروتيين PAX6 , خون بند ناف
چكيده فارسي :
چكيده
سابقه و هدف
سلول‌هاي بنيادي CD133+ بند ناف، زير گروهي از سلول‌هاي خونساز را تشكيل مي‌دهند. ثابت شده كه اين سلول‌ها از توانايي تمايز خوبي به سمت سلول‌هاي عصبي برخوردار هستند. ژنPAX6 جزيي از خانواده چند ژني PAX و از فاكتور هاي رونويسي است. ژن PAX6 ژن كنترل كننده اصلي تكامل چشم و اندام هاي حسي بافت هاي اپيدرمي و عصبي مي‌باشد. هدف از اين مطالعه، بررسي روند تمايزي سلول‌هايCD133+ به دست آمده از بند ناف كه ژن PAX6(5a) به آن‌ها انتقال يافته است بود.
مواد و روش‌ها
در يك مطالعه تجربي، ابتدا سلول‌هاي تك هسته‌اي خون بند ناف به وسيله فايكول جدا شدند، سپس سلول‌هاي CD133+ موجود در آن با روش MACS جدا ْو در محيط كشت Stem Span كشت داده شدند. سپس به منظور ساخت ويروس، وكتور ناقل ژن PAX6 و وكتورهاي كمكي(pMD2G ، psPAX2) به سلول‌هاي HEK293T ترانسفكت شدند. پس از تغليظ ويروس و تيتر كردن آن، سلول‌هاي CD133+ با تيتر مطلوب ويروس آلوده شدند. سلول‌هاي حاوي ويروس مورد نظر، از نظر وجود پروتيين‌هاي PAX6 ، Rhodopsin ، Chx10 ، Thy1 و Nestin توسط روش ايمنوسايتوشيمي ارزيابي شدند.
يافته‌ها
پس از دو هفته پروتيين‌هاي Thy-1 ، Chx10 ، Nestin و PAX6 در سلول‌هاي آلوده شده بيان شدند. هم چنين بيان ماركرهاي Rhodopsin و Nestin در سلول‌هاي كنترل مشاهده شد.
نتيجه‌گيري
نتايج حاصل از اين مطالعه بيانگر تمايز سلول‌هاي CD133+ به سلول‌هاي پروژنيتوري عصبي و سلول‌هاي شبه عصبي شبكيه از جمله سلول‌هاي گانگليوني مي‌باشد.
چكيده لاتين :
Abstract
Background and Objectives
Cord blood CD133+ stem cells are highly proliferative primitive hematopoietic progenitors. These cells can also differentiate to other cells especially neural cells. The PAX6 gene belongs to a family of genes that play a critical role in the formation of tissues and organs during embryonic development. The PAX6 protein is thought to activate genes involved in the formation of the eyes, brain and spinal cord (central nervous system), and the pancreas. The purpose of this study was to assess PAX6 (5a) gene transfer in cord blood CD133+ stem cells and evaluate its effect on differentiation.
Materials and Methods
In this experimental study, cord blood stem cells were collected and mononuclear cells isolated by ficoll; then, CD133+ cells were obtained using the CD133 MicroBead Kit in combination with the autoMACS Separator. These cells were cultured in Stem Span media. Next, HEK293T packaging cells were co-transfected with PLEX-MCS, PsPAX2, and pMD2G by calcium phosphate method. Lentiviral vectors were collected and concentrated. The appropriate amount of viruses was used to infect CD133+ cells. The successful transduced cells were selected by puromycin resistance. After two weeks, the expression of Rhodopsin, CHX10, Thy1, Nestin, and PAX6 proteins was assessed by immunocytochemisrty method.
Results
Two weeks after infection, the expression of Rhodopsin, CHX10, Thy1, Nestin, and PAX6 proteins were detected in treatment cells and the expression of Rhodopsin and Nestin in control cells.
Conclusions
The results showed CD133+ cells differentiated into progenitor neural like cells and retinal neural like cells including ganglion like cells.
اطلاعات موجودي :
فصلنامه با شماره پیاپی 49 سال 1394
كلمات كليدي :
#تست#آزمون###امتحان
