ارزيابي شيوع عفونت با سودوموناس ايروژينوزا در بيماران مبتلا به سينوزيت مزمن جراحي شده در بيمارستان رسول اكرم (ص) به روش واكنش زنجيره اي پليمراز

Evaluation of prevalence of Pseudomonas aeruginosa infection in operated patients with Chronic Sinusitis in Rasoule Akram Hospital by Polymerase Chain Reaction (PCR)

زمينه: سينوزيت مزمن يكي از شايع ترين بيماري هاي مزمن است كه افراد تمام گروه هاي سني را تحت تاثير قرار مي دهد. اين بيماري يك فرايند التهابي است كه سينوس هاي پارانازال را درگير مي كند. در مورد انتشار گونه هاي باكتريايي ايجادكننده اين بيماري اطلاعات دقيقي در دسترس نيست. Pseudomonas aeruginosa يكي از پاتوژن هاي مهم در بيماران داراي نقص در سيستم ايمني مي باشد. بنابراين اين ميكروارگانيسم يكي از مهم ترين عوامل ايجادكننده سينوزيت مزمن مي باشد. هدف اين مطالعه تشخيص مولكولي سينوزيت هاي ناشي از Pseudomonas aeruginosa مي باشد. مواد و روش‌ها: پنجاه نمونه از ترشحات سينوس هاي فكي و پيشاني بيماران مراجعه كننده به بيمارستان رسول اكرم (ص) در هنگام عمل جراحي جمع آوري شدند. DNA باكتريايي توسط كيت DNP استخراج شد و با به كاربردن سكانس هدف ژن oprL (پروتيين غشاي خارجي) و طراحي پرايمر به تشخيص اين باكتري اقدام شد. تست PCR بهينه و سپس حساسيت و اختصاصيت بررسي گرديد. محصول تكثيري به روش T/A Cloning كلون و جهت سكانسينگ و كنترل مثبت مورد استفاده واقع شد. يافته‌ها: محصول PCR با اندازه bp 504 به‌طور صحيح تكثير و بر روي ژل الكتروفورز 5/1 درصد مشاهده و از طريق سكانسينگ تاييد شد. ارزيابي پرايمرهاي انتخابي با هشت DNA مختلف، 100 درصد اختصاصيت را نشان داد. حساسيت تست بهينه شده PCR هم cfu10 ارزيابي گرديد. از 50 نمونه مورد بررسي، 22 درصد نمونه ها از جهت سودوموناس آيروزينوزا مثبت تشخيص داده شد. نتيجه‌گيري: اين مطالعه نشان داد كه تشخيص مولكولي Pseudomonas aeruginosa با به كاربردن ژن هدف oprL يك روش موثر و سريع جهت شناسايي سودوموناس آيروزينوزا مي باشد.

Background: Chronic sinusitis(CS) is one of the most prevalent chronic illnesses that affecting persons of all age groups. It is an inflammatory process that involves the paranasal sinuses. There isnʹt definitive and consistent data concerning the distribution of bacterial species in patients with Chronic Sinusitis. Pseudomonas aeruginosa has emerged as a potential pathogen in the immunocompromised patients, so this microorganism is one of the most important cause of Chronic sinusitis. The purpose of this study is molecular detection of sinusitis caused by P.aeruginosa. Material and Methods: 50 specimens was provided from the secretion of maxillary and frontal sinuses of patients from Rasoule Akram hospital during operation. Genomic bacterial DNA was extracted by DNP kit and detection of this bacteria was proceeded by employing sequence-specific target namely the outer membrane protein (oprL) gene locus and designing primers. PCR optimized and sensitivity and specificity tests was performed. Amplicon was cloned by T/A Cloning method and was used for sequencing and positive control. Results: The product of optimized PCR with 504 bp length correctly amplified and observed on electrophoreses gel 1.5% and confirmed by sequencing. Evaluation of the selected primers with 8 various DNA demonstrated 100% specificity. Sensitivity of optimized test was Evaluated 10 CFU of bacteria. From the 50 samples, 22% of specimens were positive for P.aeruginosa. Conclusion: This study indicates that molecular detection of P.aeruginosa employing the oprL gene target is a rapid and useful technique for detection of P.aeruginosa.