مرکز منطقه ای اطلاع رساني علوم و فناوري - بررسي سميت توكسين هاي آلفا (?) و اپسيلون (?) كلستريديوم پرفرنجنس تيپ D

پديد آورندگان :

كريمي، مهناز نويسنده كارشناس ارشد، دانشگاه آزاد اسلامي، واحد جهرم، دانشكده علوم پايه، گروه ميكروب شناسي Karimi, Mahnaz , شمس الديني بافتي، مهرداد نويسنده استاديار، موسسه تحقيقات واكسن و سرم سازي رازي، شعبه كرمان، گروه تحقيق و توليد فرآورده هاي بيولوژيك، Shamsaddini Bafti, Mehrdad , عزتخواه، مجيد نويسنده مربي، موسسه تحقيقات واكسن و سرم سازي رازي، شعبه كرمان، Ezzatkhah, Majid , كارگر، محمد نويسنده دانشيار، دانشگاه آزاد اسلامي، واحد جهرم، دانشكده علوم پايه، گروه ميكروب شناسي Kargar, Mohammad

چكيده فارسي :

سابقه و هدف: كلستريديوم پرفرنجنس يكي از مهمترين گونه هاي بيماري زا در جنس كلستريديوم است. توكسين هاي آلفا (?) و اپسيلون(?) از توكسين هاي اصلي اين باكتري به شمار مي آيد. اين مطالعه با هدف بررسي بيان ژن هاي كد كننده و سميت توكسين هاي كلستريديوم پرفرنجنس تايپ D در دو محيط كشت پايه و محيط كشت پايه حاوي پودر جگر انجام شد. مواد و روش ها: در ابتدا سويه استاندارد بر روي محيط كشت هاي پايه كه نيمي از آنها حاوي پودر جگر بود كشت داده شد. سپس RNA استخراج و پس از تبديل شدن به cDNA، با واكنش زنجيره اي پلي مراز دوگانه، توكسين ها از نظر بيان ژن مورد بررسي قرار گرفتند. ميزان سميت با استفاده از آزمون ميزان حداقل كشندگي (MLD) و ميزان پروتيين با دستگاه اسپكتروفتومتري بررسي شدند. يافته ها: الكتروفورز محصولات PCR با ايجاد باندهاي 324 و 625 جفت بازي به ترتيب بيان موفقيت آميز ژن هاي كد كننده توكسين هاي آلفا و اپسيلون را در دو محيط كشت نشان داد. در اين مطالعه ميانگين حداقل ميزان كشندگي توكسين در گروه هاي محيط كشت پايه رايج و محيط كشت پايه حاوي پودر جگر به ترتيب معادل 1/4000 و 1/4333 بود. ميانگين ميزان پروتيين در محيط كشت پايه رايج و محيط كشت پايه حاوي پودر جگر به ترتيب معادل 94/39 و 48/01 ميلي گرم بر ميلي ليتر محاسبه گرديد. نتيجه گيري: نتايج اين پژوهش نشان داد كه ژن هاي كد كننده در حضور پودر جگر بيان مي شوند. همچنين با ارزيابي آزمون MLD در دو محيط كشت مشخص شد كه اگرچه توكسين توانايي كشندگي خود را حفظ كرده است اما افزودن پودر جگر تاثير بسزايي بر ميزان كشندگي توكسين ندارد. Background and Objectives: Clostridium perfringens is one of the most pathogenic species in the clostridium genus. Alpha (?) and epsilon (?) are the main toxins of this bacteria. This study aimed to express the genes encoding alpha and epsilon toxins of C. perfringens type D in two media (in the base medium and the base medium containing liver powder) and to analyze their toxicity. Materials and Methods: The standard strain was inoculated in the base enrichment medium, which half of them were enriched by powder liver. Then, RNAs were extracted and after converting to cDNA using double polymerase chain reaction, the gene expression was investigated on gels. The level of protein expression was measured by spectrophotometery and the cell toxicity of these proteins was determined by minimum lethal dose (MLD) assay. Results: The electrophoresis of PCR products showed two bands, 324 and 625, which represented successful expression of the genes encoding of alpha and epsilon toxins in both media. The mean cell cytotoxicity of the proteins expressed in the base medium and the base medium containing liver powder were measured 1/4000 and 1/4333, respectively. The mean protein production in the base medium and the base medium containing liver powder were measured 94.39 and 48.01 mg/ml. Conclusions: This study showed that these genes are expressed in the presence of liver powder. Furthermore, based on the MLD assay in these media, although these genes expressed the genes in the presence of liver powder, this additives did not had any effects on their toxicity.