كشت معلق نيوسپورا كنينوم با استفاده از لنفوسيت ترانسفورم شده با تيلريا لستوكاردي

Suspension culture of Neospora caninum using lymphocyte transformed by Theileria lestoquardi

سابقه و هدف: نيوسپورا كنينوم يكي از مهم‌ترين عوامل ايجاد كننده سقط جنين گاو در جهان به شمار مي‌رود. توليد انبوه اين تك ياخته در شرايط آزمايشگاهي با استفاده از كشت سلولي و رده‌هاي سلولي مختلف انجام مي‌گردد. از طرفي استفاده از رده‌هاي سلولي معلق در توليد انبوه فرآورده‌هاي بيولوژيك بسيار مقرون به صرفه است. هدف از اين مطالعه بررسي امكان كشت تك ياخته نيوسپورا كنينوم با استفاده از رده سلولي معلق Ka6 مي‌باشد. مواد و روش ها: اين پژوهش به صورت تجربي پس از كشت تاكي‌زوييت نيوسپورا كنينوم بر روي رده سلولي Ka6 انجام شد. سپس توانايي اين رده سلولي با رده سلولي Vero كه در حال حاضر بهترين رده سلولي براي كشت نيوسپورا است با روش رنگ سنجي MTT مورد بررسي قرار گرفت. يافته ها: نتايج اين پژوهش نشان داد كه تاكي‌زوييت‌هاي نيوسپورا كانينوم به خوبي درون سلول‌هاي Ka6 وارد، تكثير و از اين سلول‌ها خارج شده‌اند. همچنين تكثير تاكي‌زوييت‌هاي اين تك ياخته در هر دو رده سلولي Ka6 و Vero نسبت به گروه كنترل معني دار بود. اما ميزان تكثير نيوسپورا بر روي رده سلولي Ka6 تفاوت معني داري نسبت به رده سلوليVero نداشت. نتيجه گيري: اين مطالعه اولين گزارش موفق آميز كشت تك ياخته نيوسپورا كنينوم با استفاده از رده سلولي معلق مي‌باشد. از آن‌جايي كه رده سلولي Ka6 يك لنفوسيت ترانسفورم شده است و به دليل امكان كشت آن به صورت معلق در سطح انبوه در بيوراكتور، استفاده از آن نسبت به رده سلولي Vero ارجحيت دارد.

Background and Objectives: Neospora caninum is one of main etiologic factors of abortion in in cattle. The mass production of protozoa in laboratory conditions is performed based on growing in different cell lines. Since using suspension cell lines are very cost effective for mass production of biological products, this study aimed to evaluate the suspension cell culturing for production of this protozoan. Materials and Methods: This study was experimentally performed bases on growth of N. caninum tachyzoites on Ka6 cell line (a cell line obtained from cattle infected with Theileria lestoquardi, Razi Institute, Shiraz, Iran. Next, based on MTT assay, ability of this cell culture for production of N. caninum was compared with Vero cell as the best current cell line for this purpose. Results: The results showed that N. caninum tachyzoites could enter into K6a cell lines and after replication released from the cells successfully. Replication of the tachyzoites was significant in both Vero and K6a cell lines in compare to the control. Conclusion: To our knowledge, this is the ?rst and successful report of suspension culture of N. caninum tachyzoites. Although, the rate of N. caninum proliferation on Ka6 cell line did not show any significant difference in compare to Vero cell line, since Ka6 cell line is a transformed lymphocytic cell and it is possible to grow massively this cell line as suspension bioreactors, it is preferred to Vero cell line.