ايمني زايي كونژوگه آلژينات سودوموناس آيروژينوزا و توكسوييد ديفتري در موش

Immunization of Pseudomonas aeruginosa alginate - conjugated to diphteria toxoid in mice

سابقه و هدف: : سودوموناس آيروژينوزا از مهم ترين پاتوژن هاي عفوني در پزشكي به شمار مي آيد. اين باكتري عفونت هاي مختلفي به ويژه در بيماران دچار سوختگي هاي شديد و افراد داراي نقص سيستم ايمني ايجاد مي نمايد. اين پژوهش با هدف تهيه تركيب آنتي ژني كونژوگه با قابليت القاي توليد آنتي بادي و ايمني خاطره اي عليه سودوموناس آيروژينوزا در مدل موش انجام شد. مواد و روش ها: اين پژوهش به صورت تجربي بر روي سويه PAO1 باكتري سودوموناس آيروژينوزا انجام شد. در ابتدا باكتري در محيط اختصاصي كشت و آلژينات آن استخراج و تغليظ گرديد. سپس توكسوييد ديفتري، ADH و EDAC به عنوان مولكول فاصله گذار و مولكول اتصال دهنده اضافه شدند. محلول كونژوگه آلژينات و توكسوييد ديفتري از ستون كروماتوگرافي (CL-2B) عبور و آزمون هاي كنترل كيفي بر روي آن انجام شد. آنتي ژن تهيه شده به موش هاي نژاد BALB/c با ميزان 10 ميكروگرم تزريق گرديد. واكسيناسيون در سه دوز به صورت داخل صفاقي با فواصل دو هفته اي انجام و خون گيري دو هفته پس از هر تزريق صورت گرفت. سپس ميزان آنتي بادي هاي سرمي براي IgG ، IgA و IgM با روش الايزا اندازه گيري شد. يافته ها: آنتي بادي هاي سرمي گروه واكسينه شده با ALG-DT پس از هر تزريق افزايش معني داري از لحاظ آماري داشتند. به طوري كه ميزان تيتر IgG تام، IgM و IgA توليد شده عليه آلژينات در گروه هاي واكسينه با كونژوگه نسبت به آلژينات خالص در سه تزريق به ترتيب به طور متوسط 5/3، 7/1 و 2/1 برابر افزايش نشان داد. نتيجه گيري: افزايش تيتر آنتي بادي در گروه هاي واكسينه با كونژوگه آلژينات نشان دهنده فعال شدن سلول هاي T و ايجاد خاطره ايمني مي باشد. بنابراين كونژوگه آلژينات و توكسوييد ديفتري مي تواند كانديد مناسبي به منظور تهيه واكسن باشد. واژگان كليدي: سودوموناس آيروژينوزا، آلژينات، توكسوييد ديفتري، واكسن كونژوگه، الايزا.

Background and Objectives: Pseudomonas aeruginosa is one of the most important infectious agent in medicine. These bacteria cause several infections especially in the patient with high degrees of burns and in immunodeficiency cases. The purpose of this study was providing conjugated antigen component that can induct production of antibody and memory immune in mouse model against Pseudomonas aeruginosa. Materials and Methods: After culturing P. aeruginosa strain PAO1 and extraction of alginate, Diphteria toxoid, ADH and EDAC were added as protein carrier, spacer and linker, respectively to the alginate. After passing the Alginate diphtheria toxoid conjugated (ALG-DT) through chromatography column (CL-2B), its quality was checked to get the quality control label. The prepared antigens were intraperitoneally injected to BALB/c mice (10µg/ml/mouse) for three times once each two weeks. Blood sampling was performed after two weeks of each injection and the levels of serum IgG, IgA and IgM were measured by ELISA. Results: The titer of serum antibodies of vaccinated group with ALG-DT increased significantly after each injection. The levels of serum IgG, IgM and IgA against alginate in vaccinated group was significantly more than the control groups, and after third injection reached to 3.5, 1.7 and 1.2 times increases, respectively. Conclusion: The increases in the levels of antibodies in vaccinated groups are an indicator of activation of T-cells and memory cells. As a result, the conjugated alginate-diphtheria toxoid can be appropriate candidates for production of vaccine.