بررسي فراواني ژن هاي lepA وralF در لژيونلا نموفيلاهاي جدا شده از افراد مبتلا به عفونت هاي تنفسي

A survey of the frequency of rahF and lepA genes in Legionella pneumophila isolated from the patients suffering of respiratory infections

سابقه و هدف: لژيونلا نموفيلا باكتري گرم منفي، هوازي و ايجاد كننده بيماري لژيونر مي باشد. ژن هاي ralF و lepA از اجزاي سيستم ترشحي تيپIV هستند و براي تكثير درون سلولي و بقا ضروري مي باشند. هدف از اين مطالعه جداسازي لژيونلا نموفيلا از نمونه هاي برونكوآلويولار و بررسي فراواني ژن هاي ralF و lepA مي باشد. مواد و روش ها: اين پژوهش به صورت مقطعي-توصيفي بر روي 100 نمونه برونكوآلويولار از بيماران مبتلا به عفونت تنفسي در چهارمحال و بختياري انجام شد. در ابتدا جداسازي لژيونلا نموفيلا با استفاده از محيط كشت اختصاصي BCYE صورت گرفت. سپس تمامي نمونه‌ها با روشPCR و با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي ژن16S rRNA لژيونلا نموفيلا مورد بررسي قرار گرفتند. همچنين فراواني ژن هاي ralF و lepA در نمونه ها، با روش PCR ارزيابي گرديد. يافته ها: از بين 100 نمونه كشت داده شده، 9% از نظر لژيونلا نموفيلا مثبت تشخيص داده شدند. همچنين از بين 100 نمونه، 12 مورد آلوده به اين باكتري با استفاده از روش مولكولي شناسايي گرديد. فراواني ژن هاي ralF و lepA در نمونه ها به ترتيب 41/66 و 25 درصد تعيين شد. 8/33 درصد از نمونه ها نيز به طور هم زمان هر دو ژن را دارا بودند. نتيجه‌گيري: دو ژن ralF و lepA در لژيونلا نموفيلا هاي جدا شده از فراواني نسبتاً بالايي برخوردارند. با استفاده از تكنيك PCR مي توان عفونت ايجاد شده توسط لژيونلا نموفيلا را در نمونه هاي تازه بدون نياز به كشت تعيين نمود. همچنين روشPCR نسبت به كشت از دقت و سرعت بيشتري براي تشخيص لژيونلا نموفيلا در نمونه‌هاي برونكوآلويولار برخوردار مي باشد.

Background & Objectives: Legionella pneumophila is an aerobic gram-negative bacterium and etiology of legionnaires disease. The ralF and lepA genes belong to the members of type IV secretion system are essential for intracellular growth and survival of bacteria. The aim of this study was to isolate L. pneumophila from bronchoalveolar lavage (BAL) fluid samples and the frequency of lepA and ralF genes. Materials & Methods: This cross-sectional study was carried out on100 BAL fluid samples collected from the patients suffering of respiratory infections who visited Charmahal-O-Bakhtiri health centers. Isolation of L. pneumophila was performed using a specific medium (BCYE). Then, all the samples were evaluated using PCR and specific primers designed for 16S rRNA gene. Furthermore, the frequency of lepA and ralF genes was determined using PCR method. Results: Overall, 9% of the total 100 samples were infected to L. pneumophila. Furthermore, molecular tests showed that 12 cases out of these samples were positive for this bacterium. The frequency of the ralF and lepA genes in these samples were measured 41.66 and 25%, respectively. In addition, 8.33% of the samples carried both genes. Conclusion: Our studies indicated high frequency of the ralF and lepA genes in L. pneumophila isolated from this area. It is possible to determine L. pneumophila in fresh samples based on PCR technique without using in media. Furthermore, PCR technique is faster and more accurate for detection of L. pneumophila in bronchoalveolar samples in comparison to culture method.