القاي آپوپتوز وابسته به p53 در رده‌ي سلولي لوسمي لنفوبلاستيك حاد پيش‌ساز لنفوسيت B (NALM-6) توسط مولكول كوچك RITA

Induction of p53-dependent Apoptosis in pre-B Acute Lymphoblastic Leukemia Cell Line )NALM-6) by Small Molecule RITA

زمينه و هدف: استفاده از مولكول‌هاي غير پپتيد‌ي با وزن مولكولي پايين كه واكنش بينp53‌ و تنظيم كننده منفي‌اش يعني MDM2‌ را تخريب مي‌كنند، يك راهكار درماني جديد جهت درمان انواع مختلف سرطان‌هاست. يكي از اين تركيبات بنام RITA (Reactivation of p53 and Induction of Tumor cell Apoptosis)به پروتيين p53 متصل شده و با مهار تشكيل كمپلكس p53- MDM2 موجب افزايش سطح p53 و در نتيجه القاي آپوپتوز در سلول‌هاي سرطاني مي‌گردد. هدف از اين مطالعه بررسي اثر RITA بر ميزان القاي آپوپتوز در سلول‌هاي NALM-6 مي‌باشد. روش بررسي: سلول‌هاي NALM-6 با غلظت‌هاي مختلف RITA در فواصل زماني معين تيمار شدند. ميزان بقاي سلولي و آپوپتوز به ترتيب با استفاده ازروش MTT و رنگ‌آميزي پروپيديوم‌ ايديد ارزيابي شدند. از تكنيك وسترن‌بلات جهت بررسي سطح پروتيين‌هاي p53 و p53 استيله، پروكاسپاز-3 و PARP فعال استفاده شد. در نهايت داده‌ها توسط آزمون تي زوجي آناليز شدند. يافته ها: RITA داراي اثر سيتوتوكسيك بر سلول‌هاي NALM-6 است. بررسي فلوسايتومتري حاكي از افزايش معنادار (05/0 > P) درصد جمعيت سلول‌هاي آپوپتوتيك در ناحيه Sub-G1 در سلول‌هاي تيمار شده با RITA در مقايسه با سلول‌هاي كنترل بود. نتايج وسترن بلات نشان دهنده افزايش القاي تجمع و استيلاسيون p53 در سلول‌هاي NALM-6 توسط RITA بود. همچنين RITA باعث آپوپتوز بواسطه افزايش فعاليت كاسپازها در سلول‌هاي NALM-6 گرديد. نتيجه گيري: RITA باعث القاي آپوپتوز وابسته به p53 در سلول‌هاي لوسمي لنفوبلاستيك حاد پيش‌ساز لنفوسيت B( NALM-6) مي‌شود. واژگان كليدي: RITA، p53، MDM2، آپوپتوز و لوسمي لنفوبلاستيك حاد

Background and Objective: The use of low-molecular-weight, nonpeptidic molecules that degrade the interaction between the p53 protein and its negative regulator MDM2 (Murine- double minute colon 2) is a new therapeutic strategy for treatment of various types of cancer. One of these agents is RITA (reactivation of p53 and induction of tumor cell apoptosis) which binds to p53 protein and inhibits formation of p53-MDM2 complex while induces apoptosis in tumor cells by increasing p53 protein levels. The aim of this study was to assess the possible in vitro apoptotic effects of RITA on pre-B ALL NALM-6 cells. Materials and Methods: NALM-6 cells were treated with different concentrations of RITA at different time intervals. The viability of NALM-6 cells and apoptosis was measured by MTT assay and PI staining, respectively. The level of p53, acetylated p53 as well as cleaved PARP and procaspase-3 were determined by Western blot in RITA-treated cells. The results were analyzed using Paired t test. Results: RITA has cytotoxic effects on NALM-6 cells. Flow cytometry analysis indicated increased apoptotic cells in sub G1 region in treated cells (P < 0.05). The Western blot analysis revealed that protein expression levels of p53, and its acetylation increased in response to RITA. In addition, RITA-induced apoptosis associated with activation of caspase-3 and PARP cleavage. Conclusion: The results of this study showed that RITA induced p53-dependent apoptosis in pre-B ALL NALM-6 cells. Key words: RITA, p53, MDM2, Apoptosis, ALL