كلونينگ و بيان ژن ATP سولفوريلاز از يك سوش ايراني باكتري ژئوباسيلوس گرمادوست (Article Uncorrected Proof)

آنزيم آدنوزين تري فسفات سولفوريلاز ( ATPS ) دربسياري از انواع موجودات وجود دارد. نقش هاي فيزيولوژيكي مختلفي در موجودات مختلف به آنزيم ATPS نسبت داده شده كه مي توان به جذب و احياي سولفات و بازيابي پيروفسفات اشاره كرد. همچنين آنزيم داراي كاربردهاي صنعتي و آزمايشگاهي متنوعي است. هدف اين مطالعه كلون و بيان ژن توليد كننده پروتئين نوتركيب ATPS ازيك سوش ژئو باسيلوس ايراني بود. بعد از جداسازي و تعيين سوش باكتري ژئوباسيلوس كواستافيلوس ، DNA ژنومي آن استخراج شد. با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي ژن ATPS، ژن مورد نظر از رويDNA ژنومي تكثير شد. نتيجه انجام PCR ژن ATPS به صورت يك باند 1188 جفت بازي بر روي ژل آگاروز مشاهده شد. سپس محصول PCR تخليص و داخل وكتور كلونينگ كلون شد. باند مربوطه پس از كلونينگ توالي يابي شد و نتيجه بررسي همولوژي آن در بانك اطلاعاتي NCBI تاييد كرد كه قطعه كلون شده مربوط به ژن ATPSاست. ژن مورد نظر در پلاسميد بياني pET 28a ساب كلون شد. امكان بيان پروتئين نوتركيب ATPS در باكتري BL21(DE3)ازروي ORF كلون شده با استفاده از ژل SDS-PAGEبررسي شد. آناليز پروتئين بيان شده بر روي ژل SDS-PAGE يك باند 47.5 كليو دالتوني را نشان داد. سنجش فعاليت آنزيمي پروتئين مورد نظر به روش لومينسانس ATP نشان داد كه پروتئين نوتركيب داراي فعاليت مي باشد. اين اولين مطالعه در رابطه با كلون، بيان و تعيين فعاليت آنزيمي ژن ATPS از باكتري ژئوباسيلوس كواستافيلوس مي باشد.