بيان ژن كد كننده پروتيين E2 ويروس اسهال ويروسي گاو در E. coli

Expression of the gene encoding E2 protein of bovine viral diarrhea virus in E.coli

اسهال ويروسي گاو (Bovine Viral Diarrhea) يكي از بيماري هاي ويروسي بسيار مهم اين حيوان است كه به وسيله يك پستي ويروس (BVDV) از خانواده فلاوي ويريده، ايجاد ميشود. BVDV با تاثيرگذاري بر روند توليد مثل نيز خسارت هاي بسياري را موجب ميشود. پروتيين E2 مهمترين پروتيين ساختماني اين ويروس در القاي پاسخ ايمني محافظت كننده است. هدف از اين پژوهش، كلونينگ و بيان ژن پروتيين E2 در باكتري E. coli بود. ژن مورد نظر با استفاده از RT-PCR تكثير و در پلاسميد pMAL-c2X كلون گرديد. از طرفي، صحت رديف نوكليوتيدي محصول هاي كلون شده با تعيين توالي نوكليوتيدي مورد تاييد قرار گرفته و بيان پروتيين توسط E. coli با استفاده از روش SDS-PAGE بررسي شد. از طرف ديگر، ويژگي آنتي ژني پروتيين E2 نوتركيب در آزمايش ايمنوبلات تاييد گشته و پس از انجام دادن سونيكاسيون سلول هاي باكتري مشخص گرديد كه پروتيين نوتركيب به شكل محلول مي باشد. اين نتايج، نشان دهنده اين است كه پلاسميد نوتركيب فوق، پروتيين E2 را به صورت كارا بيان ميكند.

Bovine viral diarrhea is one of the most important diseases of cattle caused by a pestivirus (BVDV) within the family Falviviridae. BVDV also affects reproduction system and results in a great loss. E2 protein is the most important structural protein of the virus for induction of protective immunity. The purpose of this study was to clone and express the E2 protein gene in E.coli. The gene was amplified by RT-PCR and cloned into pMAL-c2x plasmid. The identity of the cloned gene and the accuracy of cloning were confirmed by sequencing and the protein expression in E.coli was assessed by SDS-PAGE. Antigenic nature of the recombinant E2 was determined by immunoblotting and the protein was shown to be soluble, after sonication of bacterial cells. Results indicate that the aforementioned recombinant plasmid expresses the E2 protein, efficiently.