عنوان مقاله :
طراحي و ساخت پلاسميد نوتركيب حاوي تركيب ژن‌هاي Ag85B و TB10.4 مايكوباكتريوم توبركولوزيس
عنوان فرعي :
DESIGN AND CONSTRUCTION OF RECOMBINANT PLASMID CONTAINING FUSION AG85B AND TB10.4 GENES OF MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
پديد آورندگان :
ساماني‌پور، رقيه نويسنده دانشكده علوم پايه، دانشگاه ايلام، ايلام، ايران Samanipour, Roghayeh , تبيانيان، مجيد نويسنده موسسه تحقيقات واكسن و سرم سازي رازي، كرج، ايران Tebianian, Majid , مصوري، نادر نويسنده موسسه تحقيقات واكسن و سرم سازي رازي، كرج، ايران Mosavari, Nader , احمدي اسبچين، سلمان نويسنده دانشكده علوم دانشكده علوم پايه، دانشگاه ايلام Ahmady Asbchin, Salman , تقي‌زاده، مرتضي نويسنده موسسه تحقيقات واكسن و سرم سازي رازي، كرج، ايران Taghizadeh, Morteza , سليماني، كيومرث نويسنده موسسه تحقيقات واكسن و سرم سازي رازي، كرج، ايران Soleimani, Kioomars
اطلاعات موجودي :
ماهنامه سال 1394 شماره 0
كليدواژه :
Mycobacterium tuberculosis , TB 10.4 , TB10.4 , Ag 85B , مايكوباكتريوم توبركولوزيس , كاست ژني , Ag85B , Fusion gene
چكيده فارسي :
تاريخ دريافت 21/04/1394 تاريخ پذيرش 22/06/1394
چكيده
پيش‌زمينه و هدف: علي‌رغم استفاده از واكسن ب.ث.ژ از سال 1921 تابه‌حال، هنوز بيماري سل به‌عنوان دومين عامل مرگ‌ومير در بين بيماري‌هاي عفوني محسوب مي‌گردد. با افزايش مقاومت عامل مولد سل (مايكوباكتريوم توبركولوزيس) به آنتي‌بيوتيك‌هاي معمول و وسيع‌الطيف و همچنين با ظهور HIV و عفونت اين ويروس با مايكوباكتريوم توبركولوزيس، مقابله با اين بيماري بيشتر به چالش كشيده شده است. شناخت آنتي‌ژن‌هاي موثر در ايمني‌زايي محافظتي مي‌تواند به‌عنوان كانديدي براي طراحي واكسن‌هاي نوين باشد. ازجمله اين آنتي‌ژن‌ها Ag85B و TB10.4 مي‌باشد كه با وزن مولكولي به ترتيب 30 و 10 كيلودالتون توسط لنفوسيت‌هاي T شناخته‌شده و سبب القا پاسخ قوي Th1 و درنتيجه بالا بردن توليد IF-? مي‌گردند. هدف از اين تحقيق، ساخت كاست ژني حاصل از تلفيق دو ژن فوق در درون وكتور pcDNA3 مي‌باشد.
مواد و روش‌ها: DNA متعلق به مايكوباكتريوم توبركولوزيس سويه H37Rv به روش روتين استخراج گرديد. ژنوم كدكننده اين دو آنتي‌ژن توسط پرايمرهاي اختصاصي به روش PCR تكثير و سپس تلفيق گرديد و پس از هضم آنزيمي درون وكتور يوكاريوتي pcDNA3 كلون گرديد. پلاسميد نوتركيب فوق در باكتري E.coli DH5? ترنسفورم گرديد و پس از تخليص، توسط آناليز آنزيمي و توالي‌يابي مورد تاييد واقع شد.
يافته‌ها: نتايج تعيين توالي و آناليز آنزيمي تاييد نمود كه كلونينگ با موفقيت انجام شده است.
بحث و نتيجه‌گيري: قطعات TB10.4 و Ag85B تركيب گرديد و در وكتور pcDNA3 با موفقيت كلون گرديد. در مطالعات بعدي مي‌توان بيان ژن را در رده سلولي ارزيابي نمود و از اين كاست ژني به‌عنوان واكسن DNA استفاده نمود.
چكيده لاتين :
Received: 12 Jul, 2015; Accepted: 13 Sep, 2015
Abstract
Background & Aims: Tuberculosis (TB), caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb), remain as a leading causes of mortality among infectious diseases. The only current vaccine, bacillus Calmette-Gue´rin (BCG), displays highly variable efficiency for preventing tuberculosis. Thus, identification of protective antigens could be mentioned for designing new vaccines. Among different Mtb antigens, TB10.4 and Ag85B have been identified as immune stimulator antigens which induce strong cellular responses and increase production of IFN-?. In this study, we aimed to clone the fusion form of these antigens into a eukaryotic vector (pcDNA3).
Materials & Methods: After extraction of Mycobacterium tuberculosis H37Rv genome, the selected genes were amplified by specific primers with PCR method. The gene segments were fused and cloned into eukaryotic pcDNA3 vector. Recombinant plasmid was transformed into E.coli DH5? and after purification was confirmed with restriction enzyme analysis and sequencing.
Results: The results of sequencing and digestion demonstrated that TB10.4 & Ag85B genes were successfully fused and cloned into pcDNA3 vector
Conclusion: The recombinant plasmid was successfully constructed. In the future studies, the immunogenicity of this cassette could be assessed as a DNA vaccine.
عنوان نشريه :
مجله پزشكي اروميه
عنوان نشريه :
مجله پزشكي اروميه
اطلاعات موجودي :
ماهنامه با شماره پیاپی 0 سال 1394
كلمات كليدي :
#تست#آزمون###امتحان
