ايجاد بانك ذخيره ايزوله هاي مختلف پلاسموديوم هاي فالسيپاروم و ويواكس جمع آوري شده از بيماران مبتلا به مالاريا به منظور بررسي هاي ژنتيكي و زيستي

Creating a reserve bank of Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax isolates collected from malaria patients for use in studies on the genetic and biological features

زمينه و هدف: ايجاد يك مخزن برای ذخيره سازی و حفظ انگل های مالاريا در شرايط حاضر كه كشور درگير برنامه های ملی حذف مالاريا می باشد می تواند امكان دسترسی به يك منبع غنی را به منظور دستيابی و استفاده بالقوه از ژن ها و پروتيئن های منتج از گونه های پلاسموديوم های انسانی در اختيار پژوهشگران و محققان كشور قرار دهد. با توجه به كاهش روز افزون شمار مبتلايان به مالاريا در كشور لازم است هر چه سريعتر در گردآوری مجموعه پلاسموديوم های موجود و بومی منطقه با شناسايی و ثبت ژن های متعلقه اقدام كرده  تا زمينه برای مطالعات تكميلی و كاربردی برای جامعه علمی كشور هموار گردد. روش كار: پس از بيماريابی از مناطق اندميك مالاريا، گسترش نازك و ضخيم تهيه ورنگ آميزی گيمسا انجام گرفت. به منظور نگهداری طولانی مدت نمونه ها مونته و در آرشيو طبقه بندی شد. همچنين ميزان 2 ميلی ليترخون از افراد آلوده جمع آوری و كرايوپرزرويشن ايزوله ها انجام شد. بنا به اقتضا و در نظر گرفتن بودجه تعدادی از ايزوله ها  جهت تعيين شاخص ژنتيكی MSP-1 با استفاده از روشهای ملكولی PCR و PCR-RFLP مورد بررسی قرار گرفتند. برای نمونه­های پلاسموديوم فالسيپاروم ذخيره شده تست حساسيت به دارو به طريقه درون تنی انجام و نتايج ثبت شد. جمع آوری و حفظ نمونه­ها در شرايط انجماد فعاليت مداوم بانك بوده و ادامه خواهد داشت. نتايج: دست آورد های حاصل از اين طرح شامل ذخيره 131 نمونه جمع آوری شده برای جامعه علمی كشورمی باشد كه شامل 109 ايزوله پلاسموديوم ويواكس، 19 ايزوله از پلاسموديوم فالسيپاروم، و سه نمونه ميكس بوده است. هر ايزوله ی حفظ شده دارای شناسنامه اختصاصی از جمله تعيين گونه، شمارش انگلی، مليت، محل ابتلا می باشد. در  طبقه بندی ژن MSP-1 برای نمونه­های پلاسموديوم ويواكس مجموع سه هاپلوتايپ مختلف شناسايی شد كه بر اساس وزن باندهای ايجاد شده در اثر برش آنزيم PVU II به ترتيب شامل سه نوع هاپلوتايپ با فراوانی  6/20%،  2/41% و بالاخره 2/38% بود. در مورد ايزوله های پلاسموديوم فالسيپاروم حفظ شده تست درون تنی (in vivo) نسبت به داروی خط اول درمان در كشور (آرتسونات- فانسيدار)، حساسيت كليه ايزوله ها را نشان داد. نتيجه گيری: انجام اين پروژه استفاده از ذخاير حاضر را در قالب كار روتين امكان پذير ساخت كه در صورت كلون سازی تا مدتها قابل بهره برداری برای محققين علمی كشور می باشد.

Background and Aim: Considering the ongoing national malaria elimination program in Iran, establishing a bank of human Plasmodium genes and proteins can be very useful for research purposes. This study was conducted to collect some of the native isolates of human Plasmodia from endemic areas in the country. Materials and Methods: A 2ml vein-punctured blood sample was prepared from each confirmed malaria case. The samples were dispensed in EDTA pre-dosed tubes and cryopreserved for further tests. Moreover, relevant Geimsa-stained thick and thin blood smears were kept in a safe place. Tests for genetic indicators of MSP-1 was performed for each of the P. vivax samples with the RFLP-PCR techniques. In addition, an in vivo drug sensitivity test was performed for each P. falciparum case. Collecting and cryopreserving samples will continue. Results: A total of 131 samples, including 109, 19 and 3 P. vivax, P. falciparum and mixed samples, respectively, were preserved with relevant data such as species, parasitaemia and nationality of the donor. MSP-1 gene classification resulted in three different haplotypes including Hap.1, Hap.2 and Hap.3 with frequencies of 20.6%, 41.2% and 38.2%, respectively. The In vivo drug sensitivity tests on P. facilparum isolates showed that all of the isolates were sensitive to the current drug of choice, namely, a combination of artesunate and fansidar. Conclusion: This study resulted in the preservation of considerable amounts of P. vivax and P. falciparum samples for further relevant studies and research purposes.