بررسي تاثير غلظت‌هاي ليزات پلاكت انساني بر فعاليت متابوليك نوتروفيل‌ها

Survey on the effects of human platelets’ lysate concentrations on the metabolic activation of neutrophils

چكيده سابقه و هدف: عملكرد پلاكت‌ها و ساختار بيوشيميايي آنها در طول زمان نگهداري تغيير مي‌كند كه به آن، آسيب ناشي از ذخيره (platelet storage lesion) اطلاق مي‌شود. مواد مترشحه از پلاكت‌ها روي فعاليت انواع سلول‌هاي خوني تاثير دارند. اين مطالعه به‌منظور تعيين تاثير 3 غلظت 5 ،10 و50 ميكروگرم ليزات پلاكتي (در حجم واكنش 200 ميكروليتر) بر فعاليت متابوليك سلول‌هاي نوتروفيل جهت شناخت بهتر مكانيسم‌هاي تاثيرگذاري پلاكت بر سلول‌هاي نوتروفيل در خون، انجام گرفته است. مواد و روش‌ها: تحقيق به روش تجربي انجام گرفت. كنسانتره پلاكتي از پايگاه انتقال خون تهران تهيه و به دنبال 3 بار فريز- دفريز پلاكت‌ها، ليزات پلاكتي ايجاد شد. غلظت پروتييني ليزات با روش برادفورد تعيين شد. نوتروفيل از خون محيطي با روش دكستران- فايكول جدا و پس از مواجهه با غلظت‌هاي مختلف ليزات پلاكتي، به مدت يك ساعت در شرايط كشت سلولي قرار داده شدند. پس ‌از آن، نوتروفيل‌ها شسته شده و براي بررسي فعاليت متابوليك آنها، آزمونMTT انجام شد. نتايج به ‌دست ‌آمده، با T-Test آناليز شد. يافته‌ها: غلظت 5 ميكروگرم ليزات پلاكتي در روزهاي مختلف پيگيري (نگهداري پلاكت)، بيش از غلظت‌هاي ديگر مي‌تواند سبب فعاليت متابوليك نوتروفيل‌ها شده و اين فعاليت، به غلظت ليزات پلاكتي بستگي دارد و اختلاف معني‌داري بين مورد و شاهد در مقادير µg 5 و µg 50 از ليزات در حجم واكنشي مشاهده شد (04/0P?). نتيجه‌گيري: فاكتورهاي محلول مشتق شده از پلاكت در ليزات پلاكتي مي‌توانند بر فعاليت نوتروفيل‌ها تاثير بگذارند. به نظر مي‌رسد كه غلظت‌هاي مختلف ليزات پلاكتي اثرات متفاوتي روي فعاليت متابوليك نوتروفيل دارد. اين يافته، همسو با مطالعاتي است كه در آنها ليزات پلاكتي به‌ عنوان عامل رشد در محيط‌هاي كشت سلول‌هاي مختلف استفاده مي‌شود و بررسي تاثير اين غلظت (5 ميكروگرم) را روي ساير سلول‌هاي ايمني، توصيه مي‌نماييم.

Abstract: Background and Aim: Platelet concentrate (PC) is used to treat patients who are suffering from thrombocytopenia or platelet dysfunction. The biochemical structure and function of platelets are changed during storage. It is called platelet storage lesion (PSL). Platelets affect on blood cells. In this research we studied the effects of human platelets’ lysate concentrations [3(5?g, 10?g, 50?g)] on the metabolic activation of neutrophils. Results of this study could help to identify the mechanism of the affects of platelets on human neutrophils in blood. Materials and Methods: An experimental study was conducted. The PCs were prepared from IBTO and stored for 5 days. Sampling of PC units was carried out at days 2, 3 and 5 of storage. The lysates of platelets were provided with 3 times freeze-thaw of PC. Protein concentrations of the lysates were determined using Bradford method. Neutrophils were separated from whole blood using the dextran-ficol method and treated with the lysate at different concentrations. After 1 hour of incubation, the survival and metabolic activity of neutrophils were evaluated with the MTT test. The data was analyzed using the t-test. Results: The study showed that 5?g of platelet lysate concentration follow up on different days of storage can cause more neutrophil metabolic activity. The level of neutrophil activation depended on the concentration of the lysate. For the final concentrations of 5?g and 50?g of the lysate, the difference in the neutrophil metabolic activity was significant between the case and control (p-value?0.04). Conclusion: Soluble platelet-derived growth factors in the platelets’ lysate could effect on neutrophils. It seems that a different effect on the metabolic activity of neutrophils to different concentrations of platelet lysate. We recommend further investigation of the effectiveness of this dose (5?g) on other immune cells. This finding correlated with the studies related to the usage of platelets’ lysate in the culture medium as growth factor.