مقايسه تيتر آنتي بادي عليه پروتيين ها ي نوتركيب منفرد، مخلوط و ممزوج STxB، IpaD و STxB-IpaD

Comparison of Antibody Titers against the Single, Mixed, Fused and Recombinant proteins, StxB, IpaD and StxB- IpaD

مقدمه: پروتيين IpaD نقش مهمي در تهاجم، بيماري زايي و ايجاد عفونت توسط باكتري ‌ها‌ي شيگلا و اشريشياكلي دارد. يكي ديگر از فاكتورهاي بيماريزاي اصلي در شيگلا ديسانتري تيپ 1 و E.coli O157:H7 انتروتوكسين شيگلا يا (StxB) مي ‌باشد. با مخلوط يا ممزوج پروتيين IpaD با STxBمي ‌توان منتخب احتمالي مناسب براي واكسن تهيه نمود. در اين مطالعه ايمني زايي و تيتر آنتي بادي ممزوجي، مخلوط و جداگانه پروتيين ‌ها‌ي نوتركيب IpaD و STxB در موش سوري با يكديگر مقايسه شده است. مواد و روش ها: در اين مطالعه تجربي، وكتورهاي نوتركيب داراي توالي ژني stxB-ipaD، ipaD و stxB تهيه و درون باكتريcoli BL21 DE3 E. منتقل شدند، ميزان بيان پروتيين مذكور مورد ارزيابي و با استفاده از تكنيك لكه گذاري وسترن، بيان آن مورد تاييد قرار گرفت. بعد از تخليص پروتيين نوتركيب با ستون كروماتوگرافي، چهار نوبت متوالي به موش سوري تزريق شد. يافته‌ هاي پژوهش: تيتر آنتي بادي عليه آنتي ژن ‌ها‌ي STxB، IpaD، ممزوج STxB-IpaD و مخلوط STxB با IpaDدر موش‌ ها‌ي سوري از لحاظ آماري كاملاً متفاوت بود و با اضافه شدن IpaD به StxBميزان تيتر آنتي بادي افزايش يافت. بحث و نتيجه گيري: نتايج اين تحقيق، بيانگر آن است كه لينكر فوريني به وسيله شبه فورين ‌ها‌ جدا شده و پروتيين حاصل از مخلوط و امتزاج ژن هاي ipaD و stxB، مي تواند اثر ايمني زايي STxB را افزايش دهد و منتخب احتمالي مناسبي جهت توليد واكسن نوتركيب عليه انواع شيگلا و اشريشياكلي باشد.

Introduction: IpaD protein plays an im-portant role in invasion, pathogenesis and infection caused by Shigella and E. coli. Another major virulence factor in Shigella dysenteriae type 1 and E. coli O157: H7 is Shigella entrotoxin or (StxB). A suitable candidate vaccine could be made by a mixture or fusion of IpaD and STxB pr-oteins. In this study, the immunogenicity and antibody titer of fused mixed and separated recombinant proteins, IpaD and STxB, in mice were compared with each other. Materials & Methods: In this experimental study, recombinant vectors containing the gene sequences stxB-IpaD, IpaD and stxB, were prepared and also transferred into the E. coli BL21 DE3 bacterium. The protein expression levels were assessed and their expression was approved by using of We-stern blot technique. After purification of recombinant proteins with the column of chromatography, they were injected four times consecutively to the mice. Findings: The antibody titers were statisti-cally different for STxB, IpaD, STxB-IpaD and IpaD mixed with STxB antigens in the mice, and antibody levels increased by adding the StxB to IpaD. Discussion & Conclusion: The results of this study indicate that the furin linker sep-arated by semi furins and the produced pro-tein from mixture and fusion genes, ipaD and stxB, can increase STxB immunege-nicity effect, and could be a good candidate for the production of recombinant vaccines against Shigella and E. coli types