تشخيص سريع موتاسيون در كدون 43 ژن rpsL مرتبط با مقاومت به استرپتومايسين توسط تكنيك RFLP با آنزيم‌هاي اندونوكليازي BsajI و MbooII در سويه‌هاي كلينيكي مايكوباكتريوم توبركلوزيس

Rapid detection of mutations in codon 43 of rpsL gene by RFLP method with BsajI and MbooII restriction enzymes associated with resistance to Streptomycin in clinical isolates of Mycobacterium tubercul

زمينه: استرپتومايسين يكي از مهم‌ترين داروهاي موثر جهت درمان بيماري سل مي‌باشد كه مقاومت به آن به طور فزاينده‌اي گزارش مي‌شود. شايع‌ترين موتاسيون‌هاي مرتبط با مقاومت به داروي استرپتومايسين در مايكوباكتريوم توبركلوزيس در كدون‌هاي 43 و 88 ‍ژن rpsL (NC_000962.3) اتفاق مي‌افتد. هدف از اين مطالعه بررسي تغييرات ژن rpsL در سويه‌هاي كلينيكي اين باكتري با استفاده از دو آنزيم BsajI و MbooII است. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه 71 سويه كلينيكي مايكوباكتريوم توبركلوزيس استفاده شد. روش مولكولي PCR-RFLP با دو آنزيم BsajI و MboII جهت تعيين موتاسيون در كدون 43 ژن rpsL، به ترتيب در سويه‌هاي مقاوم و حساس، طراحي و نتايج به‌دست آمده با روش توالي‌يابي و فنوتيپ سويه‌ها مقايسه گرديد. يافته‌ها: در اين مطالعه از كل سويه‌هاي موجود، 25 سويه توسط آنزيم BsajI بررسي شدند كه از اين تعداد، ?? درصد سويه‌هاي مقاوم تشخيص داده شد. 46 سويه نيز توسط آنزيم MboII بررسي و حدود ?? درصد سويه‌هاي حساس فاقد موتاسيون تشخيص داده شد. اين آنزيم (برخلاف BsajI) براي تشخيص سويه‌هاي حساس طراحي شده بود. نتايج توالي‌يابي انطباق كامل با نتايج PCR-RFLP را نشان داد و وجود جهش در كدون‌هاي 43 اين ژن را در سويه‌هاي مورد مطالعه اثبات نمود. نتيجه‌گيري: نتايج مطالعه حاضر نشان مي‌دهد كه روش RFLP با آنزيم‌هاي اندونوكليازي طراحي شده مي‌تواند به عنوان روشي سريع، ساده و داراي حساسيت بالا براي تمايز سويه‌هاي مايكوباكتريوم توبركلوزيس مقاوم و حساس به استرپتومايسين مورد استفاده قرار گيرد.

Background: Streptomycin is one of the most efficient treatments of tuberculosis that increasingly reported its drug resistance. The most common mutations associated with drug resistance to streptomycin of Mycobacterium Tuberculosis, causes tuberculosis, and occurs at codons 43 and 88 of rpsL gene. The purpose of this study is study of alterations in rpsL gene with two restriction enzymes BsajI and MbooII related to drug resistant to streptomycin in clinical isolates of mycobacterium tuberculosis. Materials and Methods: This study was performed using 71 clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis. Molecular PCR-RFLP methods were designed with two enzymes BsajI and MbooII for mutation analysis at codon 43 of rpsL, in resistant and susceptible strains, respectively. Finally, the results were compared with sequencing and phenotype strains. Results: 25 subjects were studied with enzyme BsajI. This enzyme is capable of detection 64 percent of resistant and all sensitive strains. 46 strains were examined by enzyme MboII. This enzyme detected almost 91 percent of sensitive strains. MboII is selected for detection of sensitive strains (unlike BsajI). Results of sequencing rpsL genes in investigated strains, showed fully consistent with the results of PCR-RFLP and proved mutation in codon of 43 of thin genes in studied strains. Conclusion: The results showed that the PCR-RFLP with designed restriction enzymes can be used as a rapid, simple assay, and has high sensitivity for differentiation of Mycobacterium tuberculosis strains that are resistance to Streptomycin.