ارزيابي توان زيستي و آپوپتوزيس در اسپرم‌هاي انسان تيمار شده با سديم آرسنيت

Evaluation of Viability and Apoptosis in Human Sperm Treated with Sodium Arsenite

هدف: هدف از اين پژوهش ارزيابي توان زيستي و همچنين خصوصيات مورفولوژيكي و بيوشيميايي آپوپتوزيس در اسپرم‏هاي انسان تيمار شده با سديم آرسنيت بود. مواد و روش‏ها: نمونه‏هاي اسپرم انسان با غلظت‏هاي 0، 1/0، 20 و 100 ميكرومولار سديم آرسنيت براي زمان‏هاي 0، 60، 120 و 180 دقيقه تيمار شدند. ارزيابي توان زيستي اسپرم توسط سنجش MTT و تماميت DNA توسط رنگ‏آميزي آكريدين اورنژ صورت گرفت. تغييرات مورفولوژيكي آپوپتوزيس در هسته اسپرم با رنگ آميزي هوخست و ديف كوييك و جنبه بيوشيميايي آپوپتوزيس از طريق روش تانل مورد بررسي قرار گرفت. تجزيه و تحليل آماري داده‏ها به روش آناليز واريانس يك‌طرفه و اندازه‏گيري تكراري انجام شد. نتايج: سنجش MTT اثر متقابل معني‏داري بين غلظت سديم آرسنيت و زمان بر كاهش درصد توان زيستي اسپرم را نشان داد. علاوه بر آن، پس از گذشت 180 دقيقه توان زيستي اسپرم‏هاي تيمار شده با سديم آرسنيت به‌طور معني‏داري نسبت به گروه كنترل كاهش يافت. با اين وجود اين آلاينده تاثيري بر تماميت DNA و همچنين جنبه‏هاي مورفولوژيكي و بيوشيميايي آپوپتوزيس در هسته اسپرم نداشت. نتيجه‏گيري: سديم آرسنيت موجب كاهش معني‏دار توان زيستي اسپرم انسان مي‏شود و اين اثر احتمالا از طريق آسيب به هسته و DNA اسپرم صورت نمي‏گيرد.

Aim: The aim of this research was to evaluate viability as well as morphological and biochemical featears of apoptosis in human sperm treated with sodium arseinte. Material and methods: Human sperm samples were exposed with different concentration of sodium arsenite (0, 0.1, 20 and 100 µM) for 0, 60, 120 and 180 minutes. Sperm viability was done using MTT assay and sperm DNA integrity was investigated by acridine orange staining. Morphological feature of apoptosis in sperm nucleus was studied using Hoechst and Diff-Quick staining, whereas biochemical feature of apoptosis was studied by TUNEL method. Statistical analysis was carried out by one-way ANOVA and repeated measure. Results: MTT assay showed a significant interaction between sodium arsenite concentration and time on the decrease sperm viability. In addition, after 180 minutes, the viability of sperm treated with sodium arsenite was significantly decreased compared to control. However, this pollutant had no effect on DNA integrity as well as morphological and biochemical features of apoptosis in the sperm nucleus. Conclusion: Sodium arsenite caused a significant decrease in human sperm viability and this effect was not due to the damage of sperm nucleus and DNA. Keywords: Human sperm, Apoptosis, DNA integrity, Sodium arsenite, Sperm viability