تمايز اسكلروتومي سلول‮هاي سومايتي هم‏كشتي داده شده با نوتوكورد جنين جوجه

Sclerotomal Differentiation of Somitic Cells Co-Cultured with Chicken Embryonic Notochord

هدف: سومايت?ها توده?هاي اپي?تليالي از سلول?هاي مزودرمي هستند كه به اسكلروتوم و درموميوتوم تمايز مي?يابند و نوتوكورد يا مزودرم محوري در تمايز سلول?هاي سومايتي به اسكلروتوم نقش دارد. هدف از اين مطالعه بررسي نقش نوتوكورد در تمايز اسكلروتومي سومايت?ها در محيط آزمايشگاهي بود. مواد و روش‏ها: در اين مطالعه تجربي، پس از جدا سازي سومايت‏ها و نوتوكورد از جنين جوجه و قرار دادن نوتوكورد ها در قطرات آلژينات، آن?ها با سومايت?ها به?مدت شش روز در محيط آزمايشگاهي هم?كشتي داده شدند. در گروه بدون هم كشتي نيز سومايت?ها بدون حضور نوتوكورد كشت داده شدند. سومايت‏هاي تازه جدا شده وكشت داده نشده نيز به?عنوان سومايت?هاي روز صفر در نظر گرفته شدند. در نهايت مورفولوژي سلول?هاي سومايتي كشت داده شده با ميكروسكوپ اينورت مورد ارزيابي قرار گرفت و سپس با روش RT-PCR بيان ژن?هاي تمايزي اسكلروتومي و درموميوتومي در سلول?هاي سومايتي كشت داده شده بررسي شد. نتايج : در مقايسه با گروه كنترل، سلول?هاي سومايتي به‏دنبال هم كشتي با نوتوكورد پتانسيل تمايز بهتري داشتند و مورفولوژي سلول?هاي مزانشيمي با زوايد متعدد و باريك را نشان دادند. پروفايل بيان ژني نيز حاكي از بيان ژن?هاي Pax1 و BMP4 و بيان ضعيف MyoD در سلول?هاي سومايتي به‏دنبال هم كشتي با نوتوكورد بود كه از ويژگي?هاي تمايز به سلول?هاي اسكلروتومي محسوب مي?شود. نتيجه گيري: نوتوكورد روياني در محيط آزمايشگاهي به?دنبال افزايش بيان ژن?هاي دخيل در تمايز اسكلروتوم سبب القاي اين تمايز در سومايت?ها مي?گردد.

Aim: The somites are epithelial blocks of mesodermal cells differentiating to sclerotome and dermomyotome and notochord or axial mesoderm plays a major role in somitic cell differentiation to sclerotome. This study was aimed to evaluate the role of the notochord in sclerotomal differentiation of the somites in vitro. Material and Methods: In this experimental study, isolated notochords from chick embryo were encapsulated in alginate beads and co-cultured with somites for six days. In control group, the somites were cultured alone. Newly isolated and non-cultured somites were considered as somites on day 0. Eventually, morphology of cultured somitic cells was evaluated by inverted microscope and then RT-PCR method was used to analyze the sclerotomal and dermomyotomal gene expression profile. Results: In comparison with control group, the somitic cells co-cultured with notochord had highly differentiation potential and showed mesenchymal morphology with numerous slender processes. Gene expression profile of co-cultured somitic cells indicated upregulation of Pax1 and BMP4 and downregulation of MyoD, presenting sclerotomal cell characteristics. Conclusion: Embryonic notochord can induce in vitro sclerotomal differentiation in somites through upregulation of genes involving in this differentiation. Keywords: Chick embryo, Co-culture, Notochord, Somite