اثر پورمورفامين بر بلوغ تخمك و بيان ژن هاي هيستون داستيلازدر تكامل جنين هاي پارتنوژنزگوسفند

The effect of purmorphamine on oocytematuration and expression of histon deacetylase genesindevelopment of sheep parthenogenetic embryos

زمينه مطالعاتي:پورمورفامين، آگونيست مولكول سونيك هدجيهاگاست كه نقش مهمي در تنظيم فعاليت گيرنده ها و عامل رونويسي دارد. هدف:در اين مطالعه اثر پورمورفامين بر ميزان بلوغ تخمك ها و بيان ژن هايهيستون داستيلازدر جنين هاي پارتنوژنز گوسفند مورد بررسي قرار گرفت.روش كار:نمونه هاي تخمدان گوسفند از كشتارگاه صنعتي پورياي شرق سال1392در استان ورامين تهيه و مجموعه كومولوس-تخمك در محيط حاوي 250 و 500 نانوگرم پورمورفامين و كنترل (بدون پورمورفامين) كشت داده شد. 22 ساعت بعد از بلوغ، سلول هاي كومولوس از تخمك ها جدا شده و براي ارزيابي بلوغ هسته اي و سيتوپلاسمي تخمك به ترتيب از رنگ آميزي هوخست و سل تراكر بلو استفاده گرديد. همچنين گروهي از تخمك ها وارد مرحله فعال سازي شده و تا مرحله بلاستوسيست كشت داده شد. تعيين ميزان بيان ژن هاي1Hdac، Hdac2 و Hdac3به روش كمي بوسيله دستگاه Real Time PCR(qPCR) مورد ارزيابي قرار گرفت.نتايج:در تحقيق حاضر در مقدار 500 نانوگرم پورمورفامين، علي رغم اينكه تاثير معني داري بر بلوغ هسته اي تخمك نداشت اما منجر به افزايش بلوغ سيتوپلاسمي تخمك شد. همچنيندر گروه هاي تيمار يافته با پورمورفامين درصد زايگوت و بلاستوسيستبه ازاي هر كليواژدر مقايسه با گروه كنترل معني دار نشد.آناليزqPCRنشان داد كه درمحيط حاوي250نانوگرم پورمورفاميندرمقايسهباگروهكنترلبيانژنHdac2-3 و Hdac1به ترتيب افزايش و كاهش معني دارپيداكرد. نتيجه گيري نهايي:بر طبق نتايج،پورمورفامين اثر مثبتي بر ميزان بلوغ سيتوپلاسمي تخمكبه نظر مي رسد كه مقدار 500 نانوگرم پومورفامين باعث القا بلوغ سيتوپلاسمي تخمك مي-شودو يك عامل خوبي براي بهبود بلوغ سيتوپلاسمي تخمك است. v

BACKGROUND:Purmorphamine is a synthetic Sonic Hedgehog pathway agonist, which plays a critical role in the regulation activity of receptors and transcription factors.OBJECTIVES: In this study, the effect of purmorphamine on sheep oocytes maturation, and the rate expression of histon deacetylase on sheep parthenogenetic embryos development were considered.METHODS: Sheep ovaries were obtained from East Poria local slaughterhouse at Varaminin 1392 and cumulus-oocyte complexes were cultured in the medium containing 250 and 500 ng purmorphamine, and without purmorphamine as a control. After 22 hours maturation, for evaluating nuclear and cytoplasmic oocyte maturation, oocytes were denuded from cumulus cells and stained with Hoechst and cell tracker blue. Also a group of oocytes entered the parthenogenetic stage and were cultured to the blastocyst stage. RESULTS:The quantative rate expression of histon deacetylase I, II, III were examined by Real-Time PCR (qPCR). In this study, In 500 ng purmorphamine, though it had no significant effect on nuclear oocyte maturation, it increased cytoplasmic maturation. Also percentage of zygotes and blastocystspercleavage in purmorphamine treated groups was not significantly different from control group. qPCR analysis showed that in 250 ng purmorphamine the histone deacetylase II-III and histone deacetylase I rate expression were higher and lower than control group, respectively.CONCLUSIONS: According to the results, purmorphamine hadpositive influences on the cytoplasmic maturation.It seems that 500 ng concentration of Purmorphamine induces cytoplasmic oocyte maturation and is a good agent for oocyte cytoplasmic maturation in vitro.