بررسي نقص هاي ژنتيكي CVM و BLADبا استفاده از سلول‌هاي سوماتيك شير و سلول هاي خوندر جمعيتي از گاوهاي هلشتاين

The study of CVM and BLAD genetic defectsusing milk somatic cells and blood cells in a population of Holstein cows

زمينه مطالعاتي: در تحقيق حاضر نقص‌هاي ژنتيكي چسبندگي گلبول‌هاي سفيد (BLAD)و ناهنجاري ستون فقرات )(CVMدر جمعيتي از گاوهاي هلشتاين با استفاده از سلول‌هاي سوماتيك شير و سلول هاي خون مورد مطالعه قرار گرفتند. بيماري BLAD از طريق يك جهش نقطه‌اي به واسطه تاثير منفي بر سيستم خون‌ساز بدن موجب كاهش مولكول‌هاي چسبندگي در سطح نوتروفيل‌ها مي‌شود و در بيماريCVM، يك جهش نقطه‌اي موجب مي‌شود كه گوساله مرده زودتر از حد طبيعي با برخي اختلالات جسمي متولد شود.هدف:اين تحقيق به منظور جلوگيري از توليد گوساله‌هاي ناقص و يا مرده و همچنين مقايسه دو روش استخراج DNA از طريق خون و شير انجام شد.روش كار:ابتدا نمونه تانك شير از50 گله گاو شيريجمع‌آوريشد. پس از استخراج DNA، روش PCR-RFLPبا به‌كار بردن جفت آغازگرهاي اختصاصي براي تكثير قطعات ژنيو هضم آنزيمي براي شناسايي جهش‌هاي نقطه‌ايCVM و BLAD انجام گرديد.سپس يك گله (CVM+) كه شامل 120 گاو دوشا بود به طور تصادفي انتخاب و خون‌گيري از گاو‌هاي گله انجام و دو راس گاو به عنوان ناقلين CVM شناسايي شدند. براي شناسايي گله‌هاي ناقل در بين 50 گله با حدود تقريبي 10000 راس گاو دوشا، تنها از 50 استخراج DNA و تست مولكولي استفاده شد ولي براي شناسايي ناقلين در يك گله 120 راسي، تعداد 120 استخراج DNAاز خون و تست مولكولي انجام شد.نتايج:در اين تحقيقجهشBLAD در گله‌هاي مورد بررسي مشاهده نشدولي جهش نقطه‌اي CVM در 17 گله از گله‌هاي مورد بررسيمشاهده شد. نتيجه گيري نهايي:با مقايسه نتايج فوق مشاهده مي‌شود كه استفاده از تانك شير براي تشخيص وجود يك نقص ژنتيكي در گاو‌هاي ماده، به مراتب نسبت به خون‌گيري از تك تك گاو‌ها آسان‌تر و مقرون به صرفه‌ترمي‌باشد. زيرا اگر به طور متوسط هر گله داراي 200 گاو دوشا باشد در حقيقت 50 تست براي شناسايي گلههاي آلوده انجام شده است. از طرف ديگر علاوه بر مزيت اقتصادي، به دليل عدم ايجاد استرس در دام، تمايل دامداران به استفاده از شير به جاي خون به منظور بررسي نقص‌هاي ژنتيكي يا وجود بيماري‌هاي ويروسي بيشتر است و لذا استخراج DNA از شير به جاي خون توصيه مي‌گردد.

BACKGROUND:In the present research, molecular detection of Bovine Leukocyte Adhesion Deficiency (BLAD) and Complex Vertebral Malformation (CVM) in a population of Holstein cows have been done using milk somatic cells comparing with Blood cells. BLAD characterized by negative affecting on the haematopoietic system via reduced expression of the adhesion molecules on neutrophils. The molecular cause of BLAD is a single point mutation. CVM characterized by intra-uterine mortality with some disorders. The molecular cause of CVM is also a point mutation.OBJECTIVES:This study has been done in order to prevention of intra-uterine mortality and comparing of DNA extraction by Milk or blood.METHODS:In the first step of our research program, tank milk samples from 50 herds were collected. PCR-RFLP was performed to detect a point mutation of both CVM and BLAD genes. Then an affected herd with 120 cows was randomly selected for individual test using blood samples. We showed two cows out of 120 were identified as carriers of this gene.We have done 50 DNA extractions and molecular testes in order to detect existence of carriers in 50 herds with total of 10000 cows and we have done also 120 testes for detection of carriers in a herd with 120 cows.RESULTS:In these herds, we didn’t find any affected herd with the mutant allele of BLAD but we found the single point mutation of CVM in 17 different herds.CONCLUSIONS:In the present study we showed that, detection for all genetic defects using tank milk samples is more economic and easyer than the other methods. because if we assume the average of 200 dairy cows for each herd, in fact we have done 50 testes instead of 10000 in 50 herds. On the other hand, sampling with less stress for cows is always preferable for breeders to blood sampling for purposes like detection of genetic defects or viral diseases.