مطالعه جهش¬هاي موجود در نيمه اول اگزون 2 ژن GDF9گوسفند آميخته نژاد رومانوف و نژاد كرماني

Study of mutations available in first-halfexon 2 of GDF9 gene in crossbred sheep born from crossing of Romanov rams with Kermani ewes

برای كاهش تعداد میش¬های مولد روی مراتع و جلوگیری از تخریب مراتع به نظر می¬رسد كه برنامه‏های اصلاح¬نژادی روی ژن¬های با اثر عمده بر چند قلوزایی در نژاد¬های كشور برای شناسایی ژن¬های كاندیدای مؤثر بر این صفات اقتصادی لازم باشند. ژن GDF9 ازمهم¬ترین ژن¬های مؤثر بر صفت چندقلوزایی درگوسفندان می¬باشد. هدف از انجام این تحقیق شناسایی جهش¬های موجود در جایگاه نیمه اول (منتهی به5 ' رشته پیشرو) اگزون 2 ژن فاكتور رشد و تمایز شماره9(GDF9) در گوسفندان آمیخته حاصل از تلاقی بین قوچ¬های نژاد رومانوف با میش¬های نژاد كرمانی به روش PCR-SSCP بود. به این منظور، ازسیاهرگوداج تعداد 121 رأس گوسفند آمیخته خونگیری شد. پس از استخراج DNA به روش نمكی از خون كامل، واكنش زنجیره¬ای پلیمراز برای تكثیر قطعه¬ 633 جفت بازی توسط آغازگرهای اختصاصی طراحی شده برای اگزون2 این ژن انجام شد. پس از تعیین چند شكلی فضایی تك رشته¬ای محصولات PCR، الگوهای باندی مربوط به ژن GDF9 روی ژل پلی اكریل¬آمید و رنگ آمیزی با نیترات نقره، قابل مشاهده شد. در نمونه¬ مورد مطالعه، 5 الگوی باندی مختلف 1، 2، 3، 4 و 5 به ترتیب با فراوانی 314/0، 024/0، 289/0، 232/0 و 141/0 بدست آمد. همچنین نتایج توالی¬یابی منجر به شناسایی 5 جهش در این گوسفندان شد.

For decreasing the numberofbreedingewes onpastures and prevention of demolition pastures, Animal breedingprograms are necessary on genes with major effects on litter size in Iranian sheep breeds for Identify effective candidate genes on these economical traits .The GDF9 gene is one of the most important effective factors on litter size in sheep. The aim of the present study was to identify G2, G3 and G4 mutations in exon 2 of GDF9 gene in crossbred sheep (Romanov rams×Kermani ewes) using PCR-SSCP. Blood samples were collected from jugular vein of 121 crossbred individuals. Genomic DNA was extracted using salting-out method. Partial region of exon 2 (633 bp segments) of GDF9 gene was amplified with designed specific primers. The single stranded conformation polymorphism (SSCP) patterns of PCR products were studied using acrylamide gel electrophoresis and silver-nitrate staining method. Finally, we obtained 5 banding patterns 1, 2, 3, 4 and 5 with frequencies of 0.314, 0.024, 0.289, 0.232 & 0.141, respectively. The sequencing results showed presence 5 mutations in the studied population.