اثر فاكتور رشد شبه انسوليني -1، سيستئامين و بتامركاپتواتانول بر تكامل آزمايشگاهي تخمك نابالغ موش سوري

The Effect of Insulin-like Growth Factor-1, Cysteamine and β-Mercaptoethanol on the In Vitro Maturation of Immature Mice Oocytes

زمينه و هدف:  بلوغ آزمايشگاهی تخمك يك تكنيك نويد بخش برای كاهش هزينه‌ها و عوارض ناشی از تحريك تخمدان به وسيله  گونادوتروپين‌ها می‌باشد. هدف از اين مطالعه بررسی اثر هم‌زمان فاكتور رشد شبه انسولينی‌ـ1 و آنتی‌اكسيدان‌های سيستئامين و بتا مركاپتواتانول بر ميزان تكامل آزمايشگاهی تخمك نا بالغ بوده است. روش بررسی: در اين مطالعه تجربی، 48 ساعت پس از تزريق 5/7 واحد بين‌المللیPMSG   به موش‌های ماده نا بالغ، تخمك‌های ژرمينال وزيكول از تخمدان موش‌ها جدا شدند. سپس اين تخمك‌ها به محيط كشت TCM199 حاوی 50 نانوگرم بر ميلی‌ليتر فاكتور رشد شبه انسولينی ـ1 و ميزان100 ميكرومول سيستئامين و بتا مركاپتواتانول منتقل شدند. بعد از 24 ساعت كشت، تخمك‌ها به متاز دو رسيده و اين تخمك‌های بالغ شده در محيط لقاح آزمايشگاهی لقاح داده شدند و تكامل جنينی تا مرحله دو سلولی مورد بررسی قرار گرفت. داده‌های به دست آمده از اين مطالعه به وسيله تست آماری آناليز واريانس و پس آزمون توكی  تجزيه و تحليل شدند. يافته‌ها: نتايج اين مطالعه نشان داد كه ميزان بلوغ، لقاح و تشكيل جنين دوسلولی در تخمك ژرمينال وزيكول با سلول كومولوس درمحيط كشت TCM199 حاوی فاكتور رشد شبه انسولينی-1 ، سيستئامين و بتا مركاپتواتانول، به ترتيب 10/92، 30/93، 60/80 درصد و در تخمك ژرمينال وزيكول بدون سلول كومولوس در همين محيط كشت به ترتيب 80/65، 00/64 ،60/58 بوده است. كه اين تفاوت از لحاظ آماری معنی‌دار می‌باشد(001/0p<). نتيجه‌گيری: تركيب هم‌زمان فاكتور رشد شبه انسولينی، سيستئامين و بتا مركاپتواتانول، ميزان بلوغ، لقاح و تشكيل جنين دو سلولی را در تخمك‌های با سلول كومولوس نسبت به تخمك‌های بدون سلول كومولوس به ميزان بيشتری افزايش داد و اين بيانگر ضرورت افزودن مكمل های فاكتور رشد و آنتی‌اكسيدان‌ها به محيط كشت و وجود سلول كومولوس می‌باشد.

Background & aim: In vitro maturation of oocytes is a promising technique for reducing the costs and complications of ovarian stimulation by gonadotropins. The aim of this study was to investigate the effects of combination of insulin-like growth factor-1 and antioxidant cysteamine and β-Mercaptoethanol on maturation and fertilization of immature oocytes. Methods: in this experimental study, following 48 hrs injection of 7.5 IU PMSG to immature female mice, the germinal vesicle oocytes from ovaries were removed and transferred to TCM199 culture medium containing 50 ng /ml insulin-like growth factor-1 and 100 μmol Cysteamine and β -Mercaptoethanol. After 24 hrs of culture, the oocytes of MII in IVF were fertilized and embryonic development to the two cells was studied under an inverted microscope. Data analysis was performed by using ANOVA and Post hoc Tukey test. Results: The results showed that the rate of maturation, fertilization and 2-cell embryo formation in GV oocytes with cumulus cells in TCM199 medium containing insulin-like growth factor-1, Cysteamine and BME were 92.10, 93.30, 80.60% and in the GV oocytes without Cumulus cells were cultured in the same medium were 65.80, 64.00, 58.60% respectively which were statistically significant (P <0.001). Conclusion: In the present study, the simultaneous combination of insulin-like growth factor-1, β-Mercaptoethanol and CYS increased maturation, fertilization and developmental rate to 2-cells stage with cumulus cells more than the oocyte without cumulus cells to a greater extent. This represented the need of adding supplemental growth factors and antioxidants to the medium and is associated with cumulus cells.