تشخيص سريع بتالاكتاماز TEM در ايزوله هاي كلبسيلا به روش مولكولي واكنش زنجيره اي پليمراز(PCR )

Early Detection of blaTEM in Klebsiella Isolates by the Molecular Polymerase Chain Reaction Method

خلاصه سابقه و هدف: اطلاع از وجود ژن هاي مولد بتالاكتامازهاي وسيع الطيف (ESBL) در باكتري هايي چون كلبسيلا از نظر بيماري زايي و نيز ميزان شيوع آنها در جوامع، در پيشگيري و درمان عفونت هاي ناشي از آنها كمك مي نمايد.هدف از اين مطالعه شناسايي سريع ژن مولد blaTEM در كلبسيلا با استفاده از تكنيك PCR مي باشد. مواد و روشها: در اين مطالعه مقطعي، از فروردين ماه لغايت مهرماه 1392 تعداد 70 ايزوله باكتري كلبسيلا از نمونه دهاي باليني شامل (زخم، ادرار، خلط و خون) بر اساس تست هاس بيوشيميايي (وضعيت غير تخميري و توليد گاز در محيط (TSIA=Triple Sugar Iron Agar)، منفي بودن اندول، حركت و MR، تست اوره آز و VP مثبت) مجزا گرديدند. سپس فراواني سويه هاي توليد كننده بتالاكتامازهاي وسيع الطيف، باCombined disk تعيين گرديد. DNA با روش جوشانيدن استخراج شده و از نظروجود ژن TEM توسط روش PCR مورد بررسي قرار گرفت. يافته ها: از مجموع70 ايزوله كلبسيلا، در 11 نمونه فنوتيپ بتالاكتاماز وسيع الطيف مشاهده شد كه از اين تعداد ، 10 نمونه داراي ژن مقاومت بتالاكتاماز TEM بودند. همچنين از 59 نمونه ESBL منفي در آنتي بيوگرام، 9 نمونه (26%) به وسيله تست PCR از جهت ژن blaTEM مثبت تشخيص داده شد. نتيجه گيري: با توجه به شيوع روزافزون سويه هاي توليد كننده بتالاكتامازهاي وسيع الطيف و تشخيص ضعيف مقاومت آنتي بيوتيكي توسط روش سنتي آنتي بيوگرام، استفاده از تكنيك هاي دقيق تر از جمله PCR، قويا توصيه مي شود.

ABSTRACT BACKGROUND AND OBJECTIVE: Obtaining information regarding pathogenesis and prevalence of extended spectrum beta-lactamase (ESBL) producing genes seems to be necessary, since it can promote prevention modalities and treatment of the infections caused by bacterias such as Klebsiella. The aim of this study was early identification of the blaTEM gene in Klebsiella, using polymerase chain reaction (PCR) technique. METHODS: In this cross-sectional study, conducted form April to September 2013, 70 Klebsiella isolates were extracted from clinical samples (i.e., wound, urine, sputum and blood) using biochemical tests, including non-state fermentation and triple sugar iron, negative indole, motile and methyl red, as well as positive Voges–Proskauer and urease tests. Subsequently, the frequency of ESBL producing strains was determined by means of combined disk method. DNA was extracted by boiling and was investigated for the presence of TEM gene using the PCR approach. FINDINGS: In the 70 Klebsiella isolates, 11 cases of ESBL phenotype were observed, of which 10 cases contained TEM beta-lactamase resistance gene. In addition, 9 out of 59 samples (26%) of negative ESBL in antibiogram, were determined positive in terms of blaTEM gene using PCR method. CONCLUSION: Given the increasing prevalence of ESBL producing strains and poor diagnosis rate of antibiotic resistance through antibiogram method, applying more accurate techniques such as PCR is highly recommended. KEY WORDS: BlaTEM Resistance Gene, Extended Spectrum Beta-lactamases, Polymerase Chain Reaction, Antibiogram.