تشخيص سريع ويروس لارينگو تراكييت عفوني (ILTV) با استفاده از روش Real-time PCR مبتني بر ژن اختصاصي UL27

Rapid diagnosis of infectious Laryngo tracheitis virus (ILTV) by real-time PCR on UL27 proprietary gene

چكيده سابقه و هدف: ويروس لارينگو تراكييت عفوني (ILTV)، از مهمترين عوامل بيماري زا از نظر اقتصادي در صنعت طيور است. ماكيان تنها مخزن اصلي اين ويروس به شمار مي آيند. در حال حاضر براي تشخيص اين ويروس روش سريع، حساس و دقيقي وجود ندارد. اين مطالعه با هدف ارزيابي و معرفي يك روش دقيق مولكولي با استفاده از تكنيك Real-time PCR و مبتني بر ژن اختصاصي UL27 ويروس ILT، به منظور تشخيص سريع اين ويروس انجام شد. مواد و روش ها: در اين مطالعه تجربي، پس از تهيه نمونه ويروسي، DNA مربوطه با استفاده از كيت استخراج اسيدهاي نوكلييك از ويروس استخراج گرديد. سپس حضور ژن اختصاصي UL27 ويروس، ابتدا با روش PCR با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي و در نهايت با تكنيك Real-time PCR با استفاده از پرايمرها و پروب اختصاصي مورد ارزيابي قرار گرفت. يافته ها: مشاهده قطعه مورد انتظار 96 جفت بازي در آناليز ژل الكتروفورز، حضور ژن اختصاصي UL27 را در نمونه هاي ويروسي تاييد نمود. همچنين نتايج ارزيابي سنجش Real-time PCR نيز بر روي نمونه هاي ياد شده مثبت بود. نتيجه گيري: اين مطالعه نشان داد كه روش مولكولي Real-time PCR روش مناسبي براي تشخيص سريع و دقيق ويروس لارينگو تراكييت عفوني، به واسطه رديابي ژن اختصاصي UL27 مي باشد

Abstract Background & Objectives: Infectious Laryngo tracheitis virus (ILTV) is one of the major pathogens causing economic losses in poultry industry. Poultries are the only reservoir of the virus. By now there is no rapid, sensitive and accurate method for detection of this virus. This study was aimed to evaluate and introduce an accurate molecular method by using real-time PCR technique on UL27 proprietary gene of ILTV in order to fast diagnosis of the virus. Materials & Methods: In this experimental study, after preparation of viral sample, the DNA was extracted from virus by using viral nucleic acids extraction kit. Thereafter, the existence of UL27 proprietary gene of the virus was evaluated at first by traditional PCR technique using specific primers and afterwards by real-time PCR technique using specific probe and primers. Results: Observation of expected 96 bp fragment in electrophoresis gel analysis confirmed the presence of UL27 proprietary gene in this viral samples and the results of real-time PCR assay evaluation were also positive in this samples. Conclusion: This study showed that the molecular method of real-time PCR is a suitable method for rapid and accurate diagnosis of ILTV by detection of UL27 proprietary gene.