شناسايي مولكولي باكتري اشريشيا كلي K99 و ارزيابي تيتر سرمي آن در حيوان آزمايشگاهي

Molecular identification of Escherichia coli K99 and evaluation of the serum antibody titer in laboratory animals

چكيده سابقه و هدف: اشريشيا كلي مهمترين عامل ايجاد اسهال گوساله ها در روزهاي اول زندگي مي باشد. از مهمترين راهبردهاي كنترل و پيشگيري از اين بيماري واكسيناسيون مادران بارداراست كه به واسطه خوراندن آغوز به نوزاد انجام مي شود. اين مطالعه با هدف شناسايي مولكولي باكتري اشريشيا كلي K99 و ارزيابي تيتر سرمي آن در حيوان آزمايشگاهي انجام شد. مواد و روش ها: اين پژوهش به صورت تجربي بر روي حيوان آزمايشگاهي رت انجام گرفت. در ابتدا از روشMultiplex PCR براي شناسايي ژن هاي عوامل بيماريزاييK99 ، F41 و STa استفاده شد. پس از كشت باكتري در محيط كشت مينكاي مايع، با افزودن فرمالين 0/4 درصد غير فعال گرديد. آنتي ژن حاصل پس از شستشو با PBS و سانتريفيوژ آماده سازي گرديد. ميزان تقريبي آنتي ژن براي تزريق به رت در 2 دوزCFU/ml 710 و 109 تنظيم شد. گروه آزمون، آنتي ژن را در دو نوبت همراه با اجوانت آلوم به صورت زير پوستي دريافت كردند. گروه كنترل نيز همه موارد به جز آنتي ژن را دريافت نمودند. خون گيري تا هشت هفته صورت گرفت و تيتر آنتي بادي در سرم ها تعيين شد. يافته ها: رت هاي ايمن شده افزايش تيتر از هفته چهارم تا انتهاي هفته هفتم را نشان دادند. ميانگين عيارآنتي بادي هاي سرمي رت هاي ايمن شده به طور معني داري بيشتر از گروه شاهد بود. اما در گروهي كه دوز بالاتري از آنتي ژن را دريافت كرده بودند، عيارآنتي بادي بيشتر از گروه ديگر بود. اما سرعت كاهش عيار آنتي بادي هر دو گروه هم زمان و در پايان هفته هفتم مشاهده گرديد. نتيجه گيري: با توجه به نتايج به دست آمده استفاده از دوز بالاتر آنتي ژن تزريقي باعث افزايش ميزان عيارآنتي بادي و ايمني پايدارتر مي شود. بنابراين براي القاي پاسخ ايمني در بدن حيوان كارآمدتر مي باشد.

Abstract Background & Objectives: Escherichia coli is one of the primary etiologic agents for diarrhoea in neonatal calves, and the maternal immunization is an effective protection for the neonates because of feeding with colostrum. This study was aimed to molecular detection of E. coli K99 and evaluation of the serum antibody titers in laboratory animals. Materials & Methods: This study was experimentally carried out on rat to detect the marker genes. First, a Multiplex PCR was applied to detect the Sta, F41 and K99 pathogenic genes. Following growth of E. coli K99 bacteria into Minca broth, the bacteria were inactivated by 0.4% formaldehyde. The antigen was prepared after washing with PBS and centrifugation. The rats were subcutaneously inoculated with inactivated antigen with 107 and 109 CFU/ml in two groups. The control group was inoculated with a suspension containing all ingredients except for the antigen. Rat was allowed to nurse immediately after injection, and blood samples were taken for serum titration for 8 weeks. Results: An increase in the titer of serum antibody was seen after four weeks, and it continued after seven weeks. The antibody titration of rate was significantly higher in the immunized rat group than in the control group. We found good correlation in two groups. There is a grateful increase in antibody titer in group 2 (received 109 CFU/ml antigen) than in group 1 (received 107 CFU/ml antigen), but decreasing rate in the both groups were the same. Conclusion: These findings indicate that the use of killed antigen with high titer preparation containing sufficient antigen and may provide passive protection in animals. This resulted in by stimulation of immune cell due to high dose antigen.