مقايسه روش‌هاي استخراج ‏DNA‏ از بافت‌هاي ثابت شده در فرمالين

نقطه شروع‌ ‏بسياري‌ از روش‌هاي‌ بيولوژي‌ مولكولي‌، ‏ضرورت‌ جداسازي DNA‏ با كيفيت‌ عالي است. معمولا كيفيت DNA‏ ‏با ‏عواملي‌ از قبيل‌ عدم‌ آلودگي‌ ناشي‌ ‏ازRNA ‎، پروتيين، ليپيد و ساير ساختارهايي‌ كه‌ براي‌ آنزيم‌هاي‌ برشي‌ و ‏پلي‌ مرازها مزاحمت‌ ايجاد مي‌كنند ‏سنجيده‌ مي‌شود‎‏. معمولا DNA ‏استخراج ‏شده‏ از بلوك هاي پارافين و بافت‌هاي فيكس شده در فرمالين بخاطر اثرات تخريبي وارد شده بر ‏DNA، از كيفيت مطلوبي برخوردار نيستند. هدف از مطالعه، معرفي روش كارآمد در استخراج DNA از بافت‌هاي نگهداري شده در فرمالين مي‌باشد. جهت استخراج ‏DNA‏ از بافت‌هاي نگهداري شده در فرمالين، دو پروتكل مختلف از كيت Bioneer و كيت طراحي شده General Genomic Extraction ‏توسط نويسندگان مقاله مورد مقايسه قرار گرفتند. ارزيابي كمي و كيفي بر روي ‏DNA‏ هاي استخراج شده انجام گرفت. جهت تاييد و ارزيابي DNA استخراج شده، واكنش ‏PCR‏ با پرايمرهاي ژن بتاگلوبين بر روي تمام نمونه‌ها انجام شد.‏ نتايج آزمايش كيفي و كمي نشان داد كه DNA استخراج شده با استفاده از كيت General Genomic Extraction از كميت و كيفيت مطلوبتري در مقايسه با كيت Bioneer برخوردار بود. ميزان تكثير نمونه‌ها با پرايمر بتاگلوبين، حاكي از غلظت و خلوص بيشتر DNA استخراج شده با كيت مذكور در مقايسه با كيت Bioneer بود. با توجه به آسيب ناشي از نگهداري بافت در فرمالين، كيت General Genomic Extraction كارايي بيشتري در استخراج DNA داشت. اين روش مي‌تواند براي استخراج ‏DNA‏ از بافت‌هاي نگهداري شده در فرمالين و بلوك‌هاي پارافين به صورت روتين در آزمايشات تحقيقاتي و باليني مورد استفاده قرار گيرد.

The commence point of several molecular biology methods was necessity for high-quality DNA extraction. Ordinary, the quality of DNA were determinate with some factors such as DNA contamination from RNA, proteins, lipids and other structures which disturb in activity of digestive enzymes and polymerase. Usually, DNA extraction from paraffin-embedded blocks and formalin-fixed tissues were damaged, owing to the fact that destructive effect were entered on DNA inconsequence, they had not desirable quality. The aim of this study was to present an efficient method for extracting DNA from tissue that fixed in formalin. Two different protocols of Bioneer and General Genomic Extraction Kits were compared for DNA extraction from formalin-fixed tissues. Qualitative and quantitative evaluation was performed on DNA. For verification and evaluation of DNA, PCR for B-globin gene was fulfilled on all samples. The results showed that the quality and quantity of DNA which extracted with General Genomic Extraction kit were more desired in comparison with Bioneer kit. The amount of samples that amplified with primers B-globin, illustrate more concentration and purity of mentioned DNA extraction kit in compared with Bioneer kit. Due to the damage caused by fixing tissues in formalin, General Genomic Extraction Kit was more efficient for DNA extraction. This method can be used for DNA extraction from formalin-fixed tissues and paraffin-embedded blocks for routine research and clinical trials.