تهيه كشت سلولي اوليه زنبور عسل (.Apis mellifera L) به روش هاي هضم آنزيمي و نشاكاري بافت‌هاي ريز شده

Preparation of honey bee (Apis mellifera L.) primary cell culture by enzymatic disaggregation and planting minced tissues methods

در این تحقیق به منظور تهیه كشت سلولی اولیه زنبور عسل، نمونه‌هایی از مرحله لاروی و شفیرگی زنبور عسل تهیه و بر طبق دستورالعمل‌های استاندارد آماده گردیدند. جهت تهیه كشت اولیه از روش‌های هضم آنزیمی كوتاه مدت (سه مرحله 10 دقیقه‌ای)، هضم آنزیمی طولانی مدت (18 ساعته) و روش نشاكاری بافت‌های ریز شده استفاده گردید. جهت رشد سلول‌های بدست آمده در روش‌های مختلف، از محیط كشت Gracʹe غنی شده با سرم جنین گاو (FBS) به مقدار 15% در درجه حرارت oC 28 استفاده گردید. سلول‌های بدست آمده در روش‌های مختلف، از نظر تعداد و میزان رشد سلول‌های زنده وضعیت مناسبی داشته و بعد از 5-2 هفته به سطح پوششی كامل رسیدند و از آن‌ها چندین پاساژ متوالی تهیه گردید. در روش هضم آنزیمی بهترین نتیجه، از روش تریپسینه كردن طولانی مدت مرحله شفیرگی بدست آمد. نتایج روش نشاكاری بافت‌های ریز شده در هر دو مرحله لاروی و شفیرگی مشابه و آن‌ها نیز از نظر تعداد و میزان رشد سلول‌های زنده وضعیت مناسبی داشتند.

In this study, in order to preparation of primary cell culture of honey bees, some samples were collected from larval and pupal honey bee and were prepared according to standard guidelines. For preparing of primary culture, the short-time enzymatic disaggregation (three-phase, 10 min), long-time (18 h) and planting minced tissues methods were used. For growth of obtained cells in various methods, the Gracʹe medium enriched with fetal bovine serum (FBS) to a value of 15% was used in the temperature 28oC. Cells obtained in various methods, had good status in number and rate of growth of living cells and have reached in full confluency after 2-5 weeks and several successive subcultures were prepared. In enzymatic disaggregation method the best result was obtained from long-time trypsinization of pupa stage. The result of planting minced tissues method in the larval and pupal stages were similar and both were great.