اثر عصاره هيدروالكلي گل بابونه و اوستين بر ميزان بقاي سلولي و توليد نيتريك اكسايد در رده سلولي HT29 سرطان كولوركتال انساني

TheEffect of bevacizumab and hydroalcohlic Extract of Matricaria chamomilla on cell viability and nitric oxide production of the colorectal cancer cell line (HT-29)

 زمینه و هدف: آنژیوژنز با رشد تومور و متاستاز سلول‌های توموری مرتبط است، هم‌چنین این فرآیند در ارتباط مستقیم با تولید نیتریك اكساید است. هدف از این مطالعه تأثیر عصاره هیدروالكلی گل بابونه بر بقای سلولی و میزان تولید نیتریك اكساید در رده سلولی   HT29سرطان كولوركتال انسان بود. روش بررسی: در این مطالعه تجربی، تعداد 104 سلول از رده سلول سرطانی HT29  در فلاسك‌های كشت T25 كشت داده شدند. شرایط كشت، شامل محیطRPMI1640 حاوی 10درصد FBSبوده كه 100 واحد در میلی‌لیتر پنی‌سیلین، 100 میكروگرم بر میلی‌لیتر استرپتومایسین به آن اضافه شده است. سلول‌ها در دمای 37 درجه سانتی‌گراد و  اتمسفر مرطوب با 5%  ‍دی‌اكسید كربن در پلیت‌های 96 خانه انكوبه شدند. سپس سلول­ها در فاز نمایی رشد به گروه­های كنترل و تیمار تقسیم شدند. سلول‌ها با دوز های مختلف عصاره گل بابونه(2600 ، 2200، 1800، 1400، 1000 میكرو گرم در میلی لیتر محیط كشت) و اوستین(100 ،200 ،300 میكروگرم در میلی‌لیتر) تیمار شدند. توان زیستی سلول‌ها و هم‌چنین آزادسازی نیتریك اكساید از سلول‌های سرطانی به ترتیب از طریق سنجش تترازولیوم(MTT) و واكنشگر گریس اندازه‌گیری شد. داده‌ها با آزمون‌های آماری آنالیز واریانس یك طرفه و تست تعقیبی توكی تجزیه و تحلیل شدند. یافته‌ها: نتایج حاصل از این مطالعه اثر مهاری عصاره گل بابونه و اوستین را بر آزادسازی نیتریك اكساید در رده HT29 نشان داد. هم‌چنین آزمونMTT نشان داد كه اثرات مهاری بر روی رشد و تكثیر رده سلولی عصاره گل بابونه و داروی اوستین وابسته به زمان و غلظت است. بیشترین میزان مرگ سلولی در بالاترین غلظت اوستین(300میكروگرم در میلی‌لیتر) پس از 48ساعت تیمار مشاهده شد. IC50 عصاره پس از 24 ساعت و 48 ساعت به ترتیب 1881 و 1669 میكروگرم در میلی‌لیتر بود. بیشترین مهار تولید نیتریك اكساید در غلظت 2600میكروگرم در میلی لیتر ایجاد شد. نتیجه‌گیری:  هیدرو الكلی گل بابونه اثر مهاری بر رشد و تكثیر رده سلولی HT29 دارد. تولید نیتریك اكساید به وسیله سلول‌های  HT29 پس از تیمار به وسیله عصاره و داروی اوستین كاهش یافت. این اثر با مهار آنژیوژنژ رابطه مستقیم داشته و اثر ضدمتاستازی عصاره را نشان می دهد.  

Background & aim: Angiogenesis is associated with tumor growth and metastasis of tumor cells, this processes directly linked with the production of nitric oxide. In this study anticancer effects of hydroalcohoic extract of M. chamomilla and avastin (bevacizumab) were investigated via dimethyl thiazol diphenyltetrazolium bromide (MTT) cell viability assay and nitric oxide (NO) production level in colon cancer cell line (HT-29). Methods: In the present experimental study, the HT-29 cell line was cultured in RPMI-1640 media supplemented with 10% (v/v) fetal bovine serum (FBS), 1% antibiotic solution (consisting of100 U/mL penicillin and 100 µg/ml streptomycin). After growing to a favorite confluent, 104cells were seeded into separate 96-well culture microtiter plates and incubated at 370C in an incubator with 5% CO2 for 24 h prior to treatment. Every plate was treated with different   concentrations of the extract (1000, 1400, 1800, 2200, 2600 µg/ml of medium) and bevacizumab (100,200,300 µg/ml).  The production of NO was assessed by Griess reagent and the cell viability was determined by MTT assay. The results were compared by one-way ANOVA followed by Tukey-Kramer. Result: The results of MTT assay indicated that the extract and bevacizumab anticancer effect is time and dose dependent. The highest percentage of cell death was observed after 48 h incubation which increased in the bevacizumab concentration (P<0.01). Fifty percent inhibitory concentration (IC50) of extract in 24 h and 48h was 1881 and 1669 µg/ml, respectively. Inhibition of nitric oxide (NO) production was maximum in 2600 µg/ml extract concentration.                                                                                                                                               Conclusion: The results of the present study demonstrated that bevacizumab and the hydroalcohoic extract of M. chamomilla had an inhibitory effect on NO production by HT-29. The production of NO by HT-29 was inhibited after treatment by the extract of M. chamomillamay contribute to angiogenesis via decreasing of NO production and has antimatastatic effect.