مدل سازي سرطان پستان متاستازي در موش BALB/c با استفاده از رده سلولي موشي و نشاندار نمودن پايدار رده سلولي با وكتور لنتي ويروسي

Modeling of metastatic breast cancer in BALB/c mouse with mouse derived cell line and stably transduction of this cell line with lentiviral vector

چكيده مقدمه: متاستاز، عامل اصلي مرگ هاي با منشا سرطان پستان است كه عليرغم پيشرفت هاي علمي اخير، تغييرات ژنتيكي و مكانيسم هاي مولكولي درگير در متاستاز سرطان پستان هنوز به طور كامل شناخته نشده اند. مدل هاي حيواني مناسبي نيز براي بررسي مسيرهاي سلولي و ژن هايي كه به طور اختصاصي در جريان متاستاز سرطان نقش دارند، وجود ندارند. در مطالعه اخير، مدل متاستازي سرطان پستان موشي با استفاده از رده سلولي 4T1 ايجاد شد. همچنين اين رده سلولي با ساخت و وارد نمودن وكتور لنتي ويروسي، نشاندار و به موش تزريق شد كه مي تواند در تحقيقات آينده به كار برده شود. روش بررسي: رده سلولي (4T1 (CRL-2539 از بانك سلولي گرفته شد. تست تشكيل كلوني در آگار براي تاييد مهاجم بودن سلول ها انجام شد. سلول ها پس از يك شبانه روز كشت اوليه در محيطDMEM حاوي 10 درصد سرم جنين گوساله، تريپسينه و شمارش شدند. دو گروه موش به عنوان شاهد و مورد انتخاب شدند. به 3 موش گروه مورد تزريق درون رگي و به 3 موش ديگر تزريق در ناحيه نزديك پستان (fadpad#8) انجام شد و به گروه شاهد فقط آب مقطر استريل تزريق گرديد. موش ها به صورت روزانه از نظر سلامت جسماني مورد بررسي قرار گرفتند تا اينكه در روز 28 قرباني شدند و بافت هاي مورد نظر براي تهيه لام و بررسي پاتولوژي فرستاده شدند. سلول هاي اين رده با استفاده از لنتي ويروس حاوي پلاسميد PL-RGFP به صورت پايدار نشاندار شدند و دوباره به موش BALB/c ماده تزريق شدند. بررسي مدل زنده با استفاده از invivo imaging انجام شد. يافته ها: از ميان دو گروه مورد بررسي، علايم عصبي و عضلاني- استخواني نشان دهنده متاستاز سلول هاي سرطاني در موش هايي كه تزريق درون رگي شده بودند، زودتر مشاهده شد و بررسي هاي پاتولوژي نيز درگيري وسيع بافت ها توسط سلول هاي سرطاني را تاييد كرد. نتيجه گيري: رده سلولي4T1 مي تواند مدل موشي مرحله متاستازي سرطان پستان را به خوبي بازسازي نمايد. رده سلولي نشاندارشده پايدار با وكتور لنتي ويروسي مي تواند براي رديابي سلول هاي سرطاني و كارهاي تحقيقاتي آينده به خوبي به كار گرفته شود.

ABSTRACT Background: Metastasis is the major cause of Breast cancer related death. Despite advancement in the knowledge, genetic changes and molecular mechanisms required are still incompletely understood. Proper animal models for investigating the mechanisms are not available. In this study, mouse metastatic breast cancer, similar to human breast cancer, was developed by 4T1 cell line. Also, this cell line was labeled with lentiviral vector and was injected to mice for future approaches. Material and Methods: 4T1(CRL-2539) was received from Iran Cell Bank. Colony forming assay was performed for confirm of metastatic behavior. The cells were cultured in DMEM and 10%FBS , then they were trypsinized and counted. Two groups of female BALB/c mice were chosen and were injected intravenous and in fadpad region, respectively .Double distilled water were injected to control group. The mice behaviors and health were monitored until day 28 that they euthanized. Tissues were imbedded in formaline 10% and were sending to pathology lab. 4T1 cells were stably transducted with lentiviral containing PL-RGFP plasmid. This newly established cell line was injected to female BALB/c mice and monitored with invivo imaging. Results and Conclusion: Neural and muscular signs were observed earlier in mice injected intravenously. Pathological examinations confirmed huge tissue metastasis of tumoral cells. 4T1 can be a suitable cell line for modeling of breast cancer. Cell linestabley transducted with lentiviral vector is well detectable and it can be use for future researchs.