تعيين ژنوتيپ RHD جنين در مادران RhD منفي با استفاده از Real Time PCR

Fetal RHD genotyping of RhD negative women by Real-time PCR

سابقه و هدف آنتي‌ژن RhD ، نقش مهمي را در ايجاد بيماري هموليتيك جنين و نوزاد ايفا مي‌كند. هدف از انجام اين مطالعه، تعيين ژنوتيپ RhD جنين در پلاسماي مادران RhD منفي و هم چنين تعيين جنسيت جنين در هفته‌هاي نخست بارداري با استفاده از روش Real Time PCR بود. مواد و روش‌ها در اين مطالعه توصيفي، 21 نمونه DNA ، از پلاسماي مادران باردارRhD منفي كه در سنين بارداري بين 8 تا 39 هفته قرار داشتند استخراج و در مورد هر يك از آن‌ها، ژن‌هاي بتا گلوبين، SRY و اگزون‌هاي 5، 7 و 10 از ژن RHD با استفاده از روش RT-PCR مورد بررسي قرار گرفت و نتايج حاصل از آن با نتايج فنوتيپي نوزاد مقايسه گرديد. يافته‌ها توسط آزمون‌هاي كاي‌دو و كوهن و نرم‌افزار 22 SPSS تجزيه و تحليل شدند. يافته‌ها 11 مورد(4/52%) از نوزادان جنس مذكر داشتند كه در10 مورد(91%) از آن‌ها فنوتيپ RhD مثبت و در يك مورد(9%) منفي گزارش شد. هم چنين 10 مورد(6/47%) از نوزادان جنس مونث داشتند كه 9 مورد(90%) فنوتيپ RhD مثبت و يك مورد(10%) RhD منفي گزارش گرديد. اين نتايج با نتايج ژنوتيپي به دست آمده از اگزون‌هايRHD و SRY مطابقت كامل داشت. نتيجه گيري نتايج نشان داد كه بررسي ژنوتيپ RHD جنين را مي‌توان با استفاده از پلاسماي مادر و به كارگيري روش RT-PCR با حساسيت و اختصاصيت بالا انجام داد. اين روش كمك شاياني به مادران باردار RhD منفي در مورد به كارگيري صحيح از ايمونوگلوبولين D و هم چنين در مورد مديريت و جلوگيري از بروز بيماري هموليتيك جنين و نوزاد مي‌كند.

Abstract Background and Objectives The RhD antigens play a significant role in Hemolytic Disease of the Fetus and Newborn (HDFN). The intention of this study is to determine the RHD fetal genotype in the maternal plasma of RhD negative pregnant women and sex determination of the fetus in the initial weeks of pregnancy by Real-time PCR technique. Materials and Methods In this descriptive study, we used 21 plasma samples from RhD negative pregnant women. DNA was extracted from samples by Cinnapure DNA Kit. Real time PCR reactions were done with specific primers for RHD gene exons 5, 7 and 10, and beta-globin and SRY genes. The sex and Rh phenotype of children were obtained after delivery. Results Among the pregnant women, 11 (52.4%) were carrying male and 10 (47.6%) were carrying female fetuses. Out of 11 male fetuses, 10 (91%) were RhD-positive and one (9%) was RhD-negative. Out of 10 female fetuses, 9 (90%) were RhD-positive and one (10%) was RhD-negative. All prenatal genotype testing results were in concordance with postnatal RhD status and fetal sex without any false- positive or -negative results. Conclusions Performing Real-time PCR on CffDNA showed accurate, efficient and reliable results, allowing rapid and high throughput noninvasive prenatal diagnosis and determination of fetal sex and RhD status in clinical samples. This method helps RhD negative pregnant women with the proper use of immunoglobulin D and on the management and prevention of Hemolytic Disease of the Fetus and Newborn (HDFN).