بررسي بيان توالي كامل ژن گليكوپروتيين سطحي 2 ويروس هپاتيت C در مخمر پيكيا پاستوريس

Expression of full length of HCV-E2 gene in yeast Pichia pastoris

چكيده سابقه و هدف: عفونت ويروس هپاتيت C با اتصال پروتيينE2 ويروس به گيرنده سطح سلول كبد انسان آغاز مي شود. بنابراين به عنوان يكي از اهداف تحقيقات دارو و واكسن بر عليه اين عفونت مطرح مي باشد. اين مطالعه براي اولين بار در ايران با هدف انتقال تمام طول ژن HCV-2a (JFH1) E2 توسط وكتور نوتركيب E2-pPICZAa به مخمر پيكياپاستوريس سويه KM71H و بيان ژن ياد شده در اين سيستم بياني انجام شد. مواد و روش ها: ژنE2 با پرايمرهاي واجد جايگاه آنزيم هاي برش دهنده EcoRI و XbaI به طور تمام طول تكثير شد. اين ژن به وكتورهاي T-PTG19 وpPICZAa وارد و سپس به باكتري اشريشيا كلي منتقل گرديد. وكتور نوتركيب pPICZAa-E2 با روش الكتروپوريشن به مخمر منتقل شد. انتقال توسط هضم آنزيمي و تعيين توالي بررسي گرديد. مخمر به مدت 5 شبانه روز در محيط كشت بياني YNB متانول دار رشد كرد و بيان ژن مورد نظر با روش وسترن بلات بررسي شد. يافته ها: ساخت وكتور نوتركيب واجد ژن تمام طول pPICZAa-(JFH1) E2، انتقال به ميزبان هاي باكتريايي و مخمري و نيز بيان ژن در سيستم مخمري KM71H با موفقيت انجام شد. نتيجه گيري: در اين پژوهش امكان بيان ژن تمام طولE2 ويروس هپاتيت C سويه JFH1 (به عنوان سويه مدل در تحقيقات بر روي اين ويروس) با موفقيت انجام گرفت. نتايج اين مطالعه مي تواند راه گشاي پژوهش هاي آينده جهت بررسي ساختار و عملكرد اين پروتيين باشد.

Abstract Background & Objectives: Hepatitis C virus infection initiates through binding of E2 glycoprotein to its specific human liver cell receptor. Therefore, this glycoprotein is considered as one of the important targets in drug and vaccine researches against this infection. This project was accomplished for the first time to transfer the full length of E2 gene by using recombinant pPICZAa-E2 (HCV-2a, JFH1) vector into Pichia pastoris yeast KM71H strain, and to evaluate the possibility of its expression in this expression system. Materials & Methods: The E2 gene was amplified by using primers containing the EcoRI and XbaI restriction sites and was inserted into the (T-PTG 19) and (pPICZAa) vectors to be transferred into the E. coli. The recombinant pPICZAa-E2 vector was transferred into the yeast through electroporation, and it was evaluated by digestion and sequencing. The yeast was grown in YNB medium contained methanol for five days. Gene expression was studied by western blot. Results: Construction of a recombinant vector pPICZAa-(JFH1)E2, transforming the yeast and its expression in KM71H strain were successfully done. Conclusion: In this study, the whole length of E2 Ag of HCV JFH1, as the protype strain of this virus, was successfully expressed. The result of this study can be used for further analysis of the structure and function of this protein.