كاربرد PCR با استفاده از پرايمرهاي 16srRNA و كد كننده ليپاز خارج سلولي جهت تعيين هويت آئروموناس هيدروفيلا و مقايسه آن با آزمون‌هاي بيوشيميايي

Application of PCR mrthod by using of 16srRNA and encoding extracellular lipase primer to Aeromonas hydrophila identification and comparison with biochemical tests

بیماری‌های ماهی یك خطر اصلی در آبزی پروری تجاری محسوب می‌شود كه میلیون‌ها دلار ضرر اقتصادی را به این صنعت وارد می‌كنند. در این میان آئروموناس هیدروفیلا به عنوان عامل عفونی غالب در سپتی سمی‌های باكتریایی در سیستم پرورشی آب شیرین خصوصا خانواده كپورماهیان مطرح است. این باكتری عامل سپتی سمی خونریزی دهنده، پوسیدگی باله ودم و سندرم زخم همه‌گیر (EUS) در ماهی‌ها می‌باشد. در این مطالعه تعداد 213 جدایه بدست آمده از 200 قطعه كپور ماهی پرورشی بیمار (126 قطعه كپور معمولی، 39 قطعه فیتوفاگ و 35 قطعه آمور ) در استان خوزستان با آزمون‌های بیوشیمیایی و مولكولی مورد بررسی قرار گرفتند. در تست PCR برای تشخیصAeromonas sp.p از پرایمر 16srRNA مخصوص جنس و جهت تشخیص Aeromonas hydrophila از پرایمر 16srRNA و ژن لیپاز استفاده گردید. نتایج نشان داد كه 73% از جدایه‌های Aeromonas sp.p تشخیص داده شده به روش بیوشیمیایی و 52% جدایه‌های مظنون به Aeromonas hydrophila با آزمون PCR تأیید شدند. نتایج تحقیق حاضر نشان داد كه روش PCR در مقایسه با روش‌های بیوشیمیایی به عنوان یك روش سریع و دقیق در تشخیص آئروموناس هیدروفیلا مطرح می‌باشد و دارای حساسیت بالایی می‌باشد.

Fish disease is the major risk factor in commercial aquaculture with millions of dollars lost annually. Among them, Aeromonas hydrophila as dominant infectious agent in bacterial septicemia  in freshwater fish especially Cyprinidae family has been known. A. hydrophila has been associated with tail and fin rot, haemorrhagic septicaemia and epizootic ulcerative syndrome (EUS).In this study 213 isolates were obtained from 200 pieces of patient cultured carp (126 common carp,39 silver carp and 35 grass carp) from Khuzestan province farms with biochemical  and molecular tests  were investigated. 16srRNA gene was used for Aeromonas sp. Detection and 16srRNA lipase genes was used for Aeromonas hydrophila detection. The result shown 73% of Aeromonas sp. and 52% of Aeromonas hydrophila which were detected by biochemical method were conformed by PCR assay. Also result of this study was shown, the PCR assay compared with biochemical methods, is a rapid and sensitive method for Aeromonas hydrophila detection and has a high sensitivity.