جداسازي باكتري سودوموناس آئروژينوزا و ژن اينتگرون كلاس I از نمونه‌هاي ورم پستان تحت باليني گاوهاي شيري استان تهران

Isolation Pseudomonas aeruginosa bacteria and genes integron class I of subclinical mastitis in dairy cows in Tehran

  باكتری سودوموناس آئروژینوزا از مهم‌ترین پاتوژن‌های فرصت طلب بوده كه موجب بروز ورم پستان‌های تحت بالینی مقاوم به درمان در گاوهای شیری می‌باشد. هدف این مطالعه، شناسایی اینتگرون‌های كلاس I در باكتری سودوموناس آئروژینوزای جداشده از ورم پستان و تعیین حساسیت آنتی‌بیوتیكی می‌باشد. در این مطالعه توصیفی-مقطعی، تعداد 150 نمونه شیر خام از دامداری‌های مختلف استان تهران و تعدادی نیز از منطقه شهركرد جمع‌آوری و بر روی محیط‌های اختصاصی كشت داده شد. آزمایش حساسیت آنتی بیوتیكی با استفاده از روش دیسك دیفیوژن و میزان MIC با E-test مطابق دستورالعمل CLSI با آنتی بیوتیك‌هایی از گروه‌های مختلف انجام گردید. جهت شناسایی ژن‌ اینتگرون كلاس I از آزمون PCR استفاده شد. از مجموع 150 نمونه شیر، 51 نمونه 34 درصد آلوده به باكتری سودوموناس آئروژینوزا بودند. نتایج آزمون آنتی‌بیوگرام نشان داد كه بیشترین میزان مقاومت نسبت به آمپی‌سیلین، تتراسایكلین و كانامایسین به میزان 100 درصد، 2/94 و 2/94 درصد به ترتیب مشاهده شد. بیشترین مقاومت چندگانه نسبت به آنتی‌بیوتیكهای كانامایسین/آمپی سیلین/تتراسایكلین مشاهده شد. نتایج MIC‌ مشخص نمود كه نمونه‌ها به آنتی‌بیوتیك جنتامایسین بین µg  2-75/0، به آنتی‌بیوتیك سیپروفلوكساسین بین µg  38/0-094/0 و به آنتی‌بیوتیك آمیكاسین بین µg   4-05/0 حساس می‌باشند. نتایج مولكولی نشان داد، 1 جدایه (96/1 درصد) واجد ژن اینتگرون (int-1) می‌باشد. از آنجا كه بیشتر اینتگرون‏ها، ژن‏ها و آنزیم‏های تغیر دهنده آنتی‌بیوتیكها را  كد می‏كنند، حضور ژن‏های اینتگرون در نمونه‌های شیر خام درمان عفونت ناشی از باكتری سودوموناس آئروژینوزا حاوی این ژن‏ را به دلیل فقدان آنتی‏بیوتیك جدید كه طیف درمان وسیعی داشته باشد، با مشكل جدی روبرو می‌نماید. 

Pseudomonas aeruginosa is an important opportunistic pathogen that causes subclinical mastitis resistant to treatment, in lactating dairy cows. The Purpose of this study, were to identify class I integrons and determining antibiotic susceptibility of Pseudomonas aeruginosa isolated from  mastitis. In this cross-sectional study, 150 samples of raw milk were collected from different farms, transported to the laboratory and cultured on specific media. Antimicrobial susceptibility test conducted  by disk diffusion method and MIC (Minimum Inhibitory Concentration) determination test performed by E-test in accordance with CLSI guidelines, in various groups. To identify Class I integron gene PCR test were used. Of total number 150 milk samples, 51 samples (34%) were contaminated with Pseudomonas aeruginosa. Antibiotic test results showed that the highest rate of resistance were observed to Ampicillin, Tetracycline and Kanamycin at the rate of 100%, 94.2% and 94.2%, respectively. Most multiple resistances were observed against Kanamycin, Ampicillin and Tetracycline antibiotics. MIC results showed that isolated bacteria were sensitive to Gentamicin in concentration 0.75-2 μg, Ciprofloxacin at 0.094-0.38 μg and Amikacin at 0.05-4 μg. Results molecular tset showed, one isolate (1.96%) were carried Integrons gene (int-1). Since most integrons genes coding enzymes that inactive antibiotics, presence of Integrons genes in samples of raw milk, treatment infections caused by Pseudomonas aeruginosa wich carring these genes, because of the lack of new antibiotics that have a broad therapeutic range, would creat the major problems.