مقايسه ريخت‏شناسي و تكوين فوليكول‌هاي حاصل از كشت بافت تخمدان موش در سه روش قطرات معلق، زير روغن و روي صفحه كشت سه بعدي

Comparison of Morphology and Development of Follicles Derived from Cultured Mouse Ovarian Tissue in Three Methods: Hanging Drop, under Mineral Oil and Insert

هدف از اين مطالعه مقايسه كارآيي سه روش كشت بافت تخمدان شامل كشت در قطرات معلق، زير روغن و روي صفحه كشت سه بعدي در راستاي بهبود رشد آزمايشگاهي فوليكول‌هاي تخمداني بود. مواد و روش‌‌ها: تخمدان‌‌ها از موش‌‌هاي سوري نژاد NMRI ماده هفت روزه قطع نخاع گردني شده، جمع‌آوري و در محيط ?-MEM حاوي 5 درصد سرم جنين گاوي به‌مدت 7 روز و در سه گروه شامل قطرات معلق، زير روغن و روي صفحه كشت سه بعدي كشت شدند. ريخت‏شناسي و مساحت تخمدان و درصد فوليكول‌‌هاي طبيعي در سه گروه ارزيابي و مقايسه شد. به‌علت رشد بهتر تخمدان‌ها در گروه كشت روي صفحه كشت سه بعدي نسبت به بقيه گروه‌‌‌ها، فوليكول‌‌هاي پره آنترال آن‌ها جدا و به‌مدت 12 روز كشت شدند. سپس در پايان دوره كشت اخير، ميانگين قطر فوليكول، نرخ بقا و بلوغ تخمك‌‌هاي حاصل از آن‌ها در طول كشت ارزيابي شد. نتايج: درصد فوليكول‌‌هاي طبيعي پس از 7 روز كشت در گروه كشت قطرات معلق، زير روغن و روي صفحه كشت سه بعدي، به‌ترتيب 93/3±63/51، 86/5±52/40 و 49/2±85/73 و بود. درصد فوليكول‌‌هاي پره آنترال در گروه كشت روي صفحه كشت سه بعدي از 44/0±1/2 قبل از كشت به 4/2± 5/24 پس از كشت افزايش معني‌داري يافت (05/0 > P) ولي در دو گروه ديگر تفاوت معني‌داري مشاهده نشد. سطح تخمدان‌‌ها در همه گروه‌هاپس از 7 روز كشت به‌طور معني‌داري افزايش يافت (05/0 > P). در گروه تخمدان‌‌هاي كشت شده روي صفحه كشت سه بعدي، ميانگين قطر فوليكول‌‌هاي جدا شده پس از 12 روز كشت 07/7 ± 410 و ميزان تخمك متافاز دو 26/30 درصد بود. نتيجه‌گيري: كشت روي صفحه كشت سه بعدي هم از حيث رشد تخمدان و هم از حيث ريخت‏شناسي، ساختار و درصد فوليكول‌‌هاي پره آنترال در مقايسه با دو گروه ديگر مناسب‌تر بود

The present study compared the efficiency of three mouse ovarian tissue culture methods - hanging drop, under mineral oil, and on the insert with regards to improving in vitro ovarian follicular development. Methods: Ovaries from 7-day-old old female NMRI mice sacrificed by cervical dislocation were collected and cultured in ?-MEM medium supplemented with 5% fetal bovine serum for 7 days in 3 groups (hanging drop, under mineral oil and on the insert). We evaluated and compared the morphology and surface area of the ovaries and percentage of normal follicles in all groups. After the 7-day culture, the ovaries cultured on the insert showed better growth compared to the other groups. Their preantral follicles were isolated and cultured for 12 days. We assessed the follicular diameter, survival and maturation rate of these oocytes at the end of the last culture period. Results: The percentages of normal follicles in cultured ovaries were 73.85±2.49% (insert), 51.63±3.93% (hanging drop), and 40.52±5.86% (mineral oil) after the 7-day culture. The percentage of preantral follicles significantly increased from 2.1±0.44 to 24.5±2.4 in the group cultured on insert (P < 0.05), however there was no significant difference in the other groups (P > 0.05). There were significantly increased surface areas of the ovarian tissues after the 7-day culture in all groups (P < 0.05). Ovaries cultured on the insert had a diameter of isolated follicles after 12 days of culture of 410±7.07 µm and the MII rate was 30.26%. Conclusion: The ovarian growth and morphology were well preserved in tissues cultured on the insert compared to the other culture methods.