بررسي جهش‌هاي ژن ERG11 در جدايه‌هاي كانديدا آلبيكنس مقاوم به فلوكونازول جدا شده از مراكز باليني شهر رشت

Investigation of ERG11 Gene Mutations in Fluconazole Resistant Candida albicans Isolated from a Number of Rasht Hospitals

دارو‌هاي ضد قارچي از خانواده آزول يك روش انتخابي درمان عفونت‌هاي كانديدا است. با اين حال مقاومت به آزول‌ها از طريق مكانيسم‌هاي متفاوتي چون تغيير در ژن ERG11 (لانوسترول 14-آلفا ارگسترول) مي‌تواند رخ دهد. هدف از اين مطالعه، بررسي جهش‌هاي ژن ERG11 در سويه‌هاي كانديدا آلبيكنس مقاوم به فلوكونازول جدا شده ازبيماران مبتلا به ولوواژينيت كانديدايي (بين سال‌هاي 1391-1392 از برخي مراكز باليني شهر رشت)، به روش PCR و توالي‏يابي بود. مواد و روش‏ها‌: گونه‌هاي مخمري جدا شده از بيماران با استفاده از روش‌هاي استاندارد از قبيل آزمون لوله زايا تعيين هويت شدند. حساسيت دارويي بر اساس روش مرجع CLSI مقاديرMIC90 جدايه‌ها اندازه‌گيري و حساسيت آن‌ها تعيين شد. سپس جدايه‌هاي مقاوم به فلوكونازول غربالگري و بعد از استخراج DNA به روش PCR- توالي‏يابي مورد تجزيه و تحليل از نظر وجود جهش در ژن ERG11 قرار گرفتند. نتايج: از بين 40 جدايه كانديدا آلبيكنس، چهار جدايه مقاوم به فلوكونازول، با ميزان مقاومت بسيار بالا شناسايي شد (دو گونه داراي MIC90 512 ميكروگرم/ ميلي‏ليتر و دو گونه داراي MIC90 1024 ميكروگرم/ ميلي‏ليتر). در سه جدايه پلي‏مورفيسم D116E و V456G در ژن Erg11 مشاهده شد. نتيجه‌گيري: در مطالعه حاضر براي اولين بار در دنيا سطح مقاومت كانديدا آلبيكنس به فلوكونازول در حد بسيار بالا در 4 جدايه گزارش مي‌شود. همچنين به‌نظر مي‌رسد بين جهش‌هاي D116E و V456G و ايجاد مقاومت به فلوكونازول در اين جدايه‌ها ارتباط وجود داشته باشد.

: Azole antifungal drugs have been a treatment option for Candida albicans infections. However, azole resistance can occur through different mechanisms such as alterations in ERG11 (lanosterol 14?-demethylase). This study assesses ERG11 gene mutations in Candida albicans strains isolated from patients with Candidia volvovaginitis in a number of Rasht hospitals between 2012-2014 by direct PCR and sequencing. Methods: We identified the yeast strains by standard identification methods, such as germ tubes. Drug sensitivity was determined as MIC 90 values by the macrodilution broth method based on the CLSI protocol. We screened the resistant strains prior to DNA extraction and ERG11 gene mutations were confirmed by PCR sequencing. Results: From 40 strains, 4 showed high levels of resistance to fluconazole. Of these, two species had a MIC 90 of 512?g/ml and the other two species had a MIC 90 of 1024 ?g/ml. Three strains had D116E and V456G polymorphisms. Conclusion: The most fluconazole resistant Candida albicans strains worldwide were reported. Our results suggested a correlation between the polymorphism and fluconazole resistance in the Candida albicans strains