جداسازي وشناسايي دو قارچ توليدكننده آنزيم لاكاز از باگاس و ريزوسفر نيشكر

Isolation and identification of two laccase producer fungi from Bagasse and sugarcane rhizosphere

در تجزيه ليگنين، مجموعه اي از آنزيمها تحت عنوان ليگنيناز نقش دارند. لاكاز به علت ويژگيهاي خاص خود در بين آنزيمهاي تجزيه كننده ليگنين از اهميت خاصي برخوردار است. از ويژگيهاي لاكاز، اكسيداسيون انواع متعدد سوبستراها، تحمل گرمايي بالا، داشتن pH ايزوالكتريك اسيدي است. شناسايي ميكروارگانسيم هاي جديد با قدرت توليد و ترشح بالاتر اين آنزيم صنعتي از اهميت انكارناپذيري برخوردار است. لذا در اين تحقيق جداسازي، غربالگري و شناسايي قارچهاي توليدكننده لاكاز از باگاس و ريزوسفر نيشكر انجام شد. به منظور غربالگري سويه هاي مولد لاكاز از محيط كشت MEA حاوي 1/0 گرم در ليتر ABTS و 5/0 ميلي مول در ليتر گاياكل استفاده شد. براي سنجش ميزان كمي آنزيم لاكاز از روش نيكو پاولا استفاده شد. در اين تحقيق از بين 22 قارچ غربالگري شده، دو جدايه Alternaria alternata و Retroconis sp با بيشترين ميزان توليدآنزيم لاكاز شناسايي شدند. دو جدايه با استفاده از تكثيرPCR و تعيين توالي ناحيه ITS، DNA ريبوزومي و همچنين خصوصيات مورفولوژيك شناسايي شدند. ميزان توليد لاكاز جدايه ها در شرايط هوادهي و سكون بررسي شد. مطالعه بر روي اين جدايه ها نشان داد كه شرايط هوادهي و سكون اثرات متفاوتي در ميزان توليد لاكاز ازاين جدايه ها داشت.

Complex of enzymes in the name of Ligninase are involved in lignin degradation. Special properties of Laccase among the lignin degradation enzymes make them more important. Oxidation of wide range of substrates, high heat tolerance and acidic isoelectric pH are main properties of laccase. Identification of new microorganism with higher production and secretion laccase is very valuable. In this research, laccase producing fungi was isolated, screened and identified from Bagasse and sugarcane rhizosphere. In order to screen laccase producing strains malt extract agar medium containing 0.1gl-1 ABTS or 0.5mMl-1 Guaiacol was used. Laccase activity was determined as described by Niku-Paavola et al. In this study, among 22 fungi screened, Alternaria alternata and Retroconis sp isolates were identified with the highest laccase production. Two species were identified using PCR amplification and sequencing of the internal transcribed spacer ‘ITS’regions of the ribosomal DNA and by basic morphology. In this research laccase activity has been determined in agitation and stationary state. These results showed that agitation and stationary conditions had different effects on laccase production rate of these isolates.