مطالعه كمي بيان ژنهاي دخيل در مسيرهاي بقاي سلولي و اتوفاژي در رده سلولي T-47D با ﺗﺄكيد بر اعمال مقاومت سرمايي در سلولها در حضور DMSO

Quantitative Study of the Genes Involved in Cell Survival and Autophagy Pathways in T-47D Cell Line with Emphasis on Upgrading Cold Resistance of the Cells in the Presence of DMSO

دي‌متيل‌سولفوكسيد (DMSO) يكي از حفاظت‌كننده‌هاي سرمايي است كه در زمان انجماد و نگهداري طولاني مدت سلولها مورد استفاده قرار مي‌گيرد. در اين مطالعه، ساز و كار حفاظتي اين ماده در رابطه با مسيرهاي بقاي سلولي و اتوفاژي مد نظر قرار گرفته است. بررسي سطح بيان ژنهاي دخيل در اتوفاژي با استفاده از Real time RT-PCR نشان داد كه در پايين‌ترين غلظت از DMSO ژنهاي دخيل در مسير اتوفاژي (atg5، lc3، beclin1، dram و p53) افزايش بيان مي‌يابند و به همين علت، با راه ‌افتادن اتوفاژي مرگ، سلولها توان حياتي پايين‌تري را در قياس با سلولها‌يي كه در غلظتهاي بالاتر از ماده حفاظت‌كننده سرمايي منجمد شده‌اند دارا مي‌باشند. افزايش توان حياتي سلولها در غلظتهاي بالاتر DMSO (بالاتر از 10 درصد) به خاطر تبديل اتوفاژي مرگ به اتوفاژي بقا روي مي‌دهد كه با افزايش سطح بيان ژنهاي مسير AKT/mTOR مورد تأييد قرار گرفته است. مطالعه همزمان اتوفاژي و مسير AKT/mTOR مي‌تواند به عنوان يكي از روشهاي تفكيك اتوفاژي مرگ و بقا تلقي و استفاده گردد.

Dimethylsulfoxide (DMSO) is one of the cryoprotectants utilizing in freezing and long term maintenance of the cells. In this study, the mechanism of protection of this mater in relation with cell death and autophagy is envisaged. Study of the expression level of autophagic genes (atg5، lc3، beclin1، dram و p53), using real time RT-PCR, indicated that at the lowest concentration of DMSO the genes involved in autophagy are over-expressed, thus regarding to death autophagy induction, the cells have lower viability relative to those cells which are freezed at the higher concentrations of cryoprotectant. Increasing cell viability, at the greater concentrations of DMSO (over than 10%), occurs because of the converting of death autophagy to cytoprotective one which is supported by means of over-expression of the genes involved in the survival pathway. Simultaneous study of autophagy and AKT/mTOR pathway can be utilized as a separating method for death and survival autophagy.