توليد پولولاناز نمك دوست خارج سلولي توسط سويه Ha25 Halorubrumجدا شده از درياچه پرشور آران و بيدگل

The industrial application of enzymes which can withstand in harsh condition such as high salinity and temperature has greatly increased. An extracellular halophilic and moderately thermophilic pullu

امروزه كاربرد زيست فن آوري آنزيمهايي كه در شرايط سخت صنعتي مانند دما و شوري بالا پايدارند رو به افزايش است، از اين رو تلاشهاي متعددي در جهت جداسازي اين آنزيمها از ميكروارگانيسم هاي كران دوست انجام گرفته كه در اين ميان نمك دوستها، مهم ترين توليد كننده اين آنزيمها هستند. در اين پژوهش يك آركي نمك دوست كه به عنوان جنس Halorubrum شناسايي شد، آنزيم پولولاناز خارج سلولي نمك دوست و گرمادوست نسبي را در محيط كشت داراي 23 درصد نمك تام توليد كرد. توليد آنزيم پولولاناز در اين سويه با ميزان رشد هماهنگ بود و در ميانه فاز سكون به بيشترين ميزان خود رسيد. در حضور غلظت 0/3 تا 0/4 مولار نمك NaCl بيشينه توليد آنزيم مشاهده شد ( U ml-185). دما و pHبهينه براي توليد آنزيم به ترتيب 45 درجه سانتي گراد و0/7 تعيين شد. منابع مختلف كربن مانند مالتوز، نشاسته و پولولان به عنوان القا كننده و گلوكز به عنوان مهار كننده توليد آنزيم شناسايي شدند. غلظت بهينه منيزيم براي توليد آنزيم 1/0 مولار تعيين و در نبود يونهاي منيزيم، رشد سويه و توليد آنزيم مشاهده نشد. بيشينه فعاليت آنزيم در حضور غلظت 0/3 مولار نمك NaCl و در دماي 50 درجه سانتي گراد اندازه گيري و در دماي 45 و 35 درجه سانتي گراد به ترتيب كاهش 25 درصد و 72 درصد در فعاليت آنزيم مشاهده شد. pH بهينه براي فعاليت آنزيم 8 تعيين و در pH 0/6 و 0/9، پس از مدت 30 دقيقه به ترتيب 5/49 درصد و 4/32 درصد از فعاليت آنزيم باقي ماند.

The industrial application of enzymes which can withstand in harsh condition such as high salinity and temperature has greatly increased. An extracellular halophilic and moderately thermophilic pullulanase was produced by a newly isolated extreme haloarchaeal strain designated as Halorubrum Ha25 in culture medium with 23% of total salt. The enzyme production corresponded with growth. The isolate was capable of producing pullulanase in the presence of NaCl and the maximum enzyme production was observed at 3-4 M NaCl (85 U ml-1). Optimum pH and temperature for enzyme production were 7.0 and 45 °C, respectively. Various carbon sources including maltose, starch and pullulan were induced enzyme production, while glucose repressed it. No cell growth and enzyme production were observed in the lack of Mg2+ and the optimum concentration was 0.1 M. The maximum pullulanase activity was obtained in the medium containing 3 M NaCl at 50 °C, with 25% and 72% activity reductions at temperature 45 and 35°C, respectively. The optimum pH for activity of the enzyme was 8.0, with 49.5% and 32.4% residual activities at pH 6.0 and 9.0, respectively.