شناسايي بذور سوياي تراريخت مقاوم به رانداپ با استفاده از روشهاي مولكولي

Detection of Transgenic Roundup Ready Soybean Seeds by Molecular Methods

با توجه به افزايش سطح محصولات دست ورزي شده ژنتيكي، شناسايي و تعيين سطح كمي آنها با روشهاي مطمين و حساس ضروري مي باشد. در ايران بخش عمده سوياي مصرفي، وارداتي و از نوع تراريخت مي باشد. در اين مطالعه از روشهاي مولكولي جهت شناسايي كيفي و كمي بذور سوياي تراريخت مقاوم به رانداپ در سطوح مختلف شامل تعيين نوع تراژن بكار رفته، سازه هاي ژني و رخداد اختصاصي سوياي مقاوم به رانداپ استفاده شده است. در ابتدا با استفاده از چندين جفت آغازگر مربوط به عناصر تراژن، آناليزهاي مولكولي غربال گري در سطح كيفي انجام گرديد. در ادامه، آناليزهاي نيمه كمي براي سري رقتهاي مختلفي از ِDNA به دست آمده از اين بذور تراريخت با همان جفت آغازگرها نسبت به قطعه تكثير يافته با آغازگرهاي ژن كنترل اختصاصي سويا (لكتين) نيز انجام شد. بدين ترتيب، ميزان حد آستانه مختلفي براي شناسايي اين عناصر به دست آمد به طوري كه در سنجش مبتني بر توالي پيش بر 35S نسبت به ژن خانه دار لكتين، ميزان 1 درصد و در سنجش مبتني بر تواليهاي پايان دهنده NOS و cp4 epsps نسبت به ژن خانه دار لكتين ميزان 5/0 درصد و در نهايت در سنجش مبتني بر تواليهاي سازه ژني CTP-35S)) و رخداد اختصاصي سويا pDNA-35S))،ميزان 5 درصد را نشان داد. به طور كلي، حساسيت آزمون نيمه كمي براي تواليهاي پايان دهنده NOS و cp4 epsps با استفاده از روش زنجيره اي پلي مراز معمولي بيشتر از ساير عناصر بوده است. بنابراين اين روش مي تواند جهت شناسايي و غربال گري سريع نمونه ها و محموله هاي حاوي سوياي تراريخت مقاوم به رانداپ به كار رود.

As genetically modified organisms (GMOs) development is now increasing, detection and determination of their quantitative threshold using reliable and sensitive methods would be necessary. The aim of this study was to introduce reliable methods for qualitative and quantitative detection of Roundup-tolerant soybean particularly at event level via molecular approaches. For primary screening, we used polymerase chain reaction with several element–specific primers for detection of different percent of transgenic and non-transgenic Roundup ready soybean seed samples. Furthermore, semi-quantitative assays were performed using the same primers in combinations with soybean lectin-specific primers. The limit of detection (LOD) obtained for CTP-35S construct and event-specific (pDNA-35S) was 5%. This index for cp4 epsps and NOS terminator sequences was 0.5% and for CaMV 35S promoter was 1%. Results showed that the sensitivity of analysis for NOS terminator and cp4 epsps sequences was more than other elements and therefore, this method could be applied for rapid screening of Roundup Ready transgenic soybean samples.