تمايز سلولهاي بنيادي پوست انسان به سلولهاي ‌سازنده انسولين در محيط برون‌تن با استفاده از گلوكز و عصاره پانكراس ترميمي

In vitro differentiation of human skin-derived precursors cells into insulin producing cells by glucose and rat pancreatic extract

سلول درماني يكي از روشهاي اميدواركننده در درمان ديابت نوع1 مي باشد. يكي از مناسب ترين گزينه ها براي اين منظور، سلولهاي پيش ساز مشتق از پوست Skin-derived precursors cells (SKP) است كه پتانسيل تمايز به سلولهاي سازنده انسولين Insulin producing cells (IPC) را دارند. در اين مطالعه سلولهاي پيش ساز مشتق از پوست انسان Human skin-derived precursors cells (hSKP) جدا و تكثير شده و تحت تاثير عصاره پانكراسي (دو روز بعد از 60 درصد پانكراكتومي) به IPC تمايز داده شدند. به منظور تمايز، hSKP ها در محيط DMEM حاوي FBS و عصاره پانكراسي و گلوكز براي مدت 14 روز كشت داده شدند. توليد انسولين اين سلولها با رنگ ديتيزون كه به طور اختصاصي براي شناسايي انسولين به كار مي رود، مورد بررسي قرار گرفت. علاوه بر اين، بيان انسولين در سلولها با ايمونوسيتوشيمي بررسي شد و ترشح انسولين با استفاده از روش ايمونواسي آنزيمي ELISA مورد تاييد قرار گرفت. تجمعات سلولي خوشه مانند بعد از حدود 14 روز ظاهر شدند. اين خوشه ها نسبت به آنتي بادي ضد انسولين مثبت بودند و قادر به ترشح مقادير قابل تشخيص انسولين در يك رفتار وابسته به غلظت گلوكز بودند. نتايج اين مطالعه نشان داد كه hSKP تحت تيمار با عصاره پانكراسي توانايي تمايز به سلولهاي سازنده انسولين را دارند كه مي تواند گامي در جهت سلول درماني ديابت در آينده باشد.

Cell-therapy provides a promising alternative for the treatment of type 1 diabetes. One of the most proper candidates is multipotent skin-derived precursors cells (SKPs), which can be differentiated into insulin producing cells (IPCs). In this study, human skin-derived precursors (hSKPs) were isolated, expanded and differentiated into IPCs in vitro, through exposure to rat pancreatic extract (2 days after a 60% pancreatectomy). In order to differentiation, SKPs were Cultured in DMEM, containing FBS, pancreatic extract and glucose for 14 days. In order to verify insulin production in the cells, dithizone-staining, which is a method for insulin identification, was employed. In addition, insulin expression was examined immunocytochemically, and insulin secretion was examined using enzyme-linked immunosorbent assay. Cellular clusters appeared after approximately 14 days. The clusters were found to be immunoreactive to insulin. Cellular clusters were also able to secrete detectable amounts of insulin in glucose concentration dependent manner. The results of the current study showed that pancreatic extract treatment can differentiate human SKPs into functional IPCs. This may offer a safer cell source for future stem cell-based therapies.