بررسي نقش آمينواسيدهاي اطراف توالي جايگاه فعال در فعاليت آنزيم كيتيناز باكتري Serratia marcescens B4A

Study of active site adjacent residues on Serratia marcescens B4A chitinase catalytic activity

كيتينازها يكي از آنزيم هاي صنعتي مهم محسوب مي شوند كه از اهميت به سزايي در خصوص تجزيه مواد كيتيني، پاكسازي محيط زيست و كنترل قارچ هاي پاتوژن گياهي و آفات دارند كه با شكستن اتصالات گليكوزيدي ?-1,4 سبب تجزيه كيتين مي شوند. اين آنزيمها در ساختار خود داراي دمين كاتاليتيكي 8 (B/?) حاوي تواليهاي حفاظت شده اي به نام موتيف DXDXE روي رشته 4B هستند كه آسپارتات و گلوتامات موجود در اين توالي و همچنين آمينواسيدهاي موجود در اطراف اين توالي نقش اصلي در فرآيند هيدروليز پيوند گليكوزيدي بازي مي كنند. بررسي آمينو اسيدهاي نزديك به جايگاه فعال مي تواند به درك نقش آنها در فرآيند كاتاليز كمك كند. در اين پروژه به منظور بررسي نقش گليسين 191 و سرين 390 موجود در اطراف توالي حفاظت شده در فرآيند كاتاليتيكي كيتيناز Serratia marcescens B4A، اين دو آمينواسيد جهش داده شدند و پس از همسانه سازي در حامل بياني و بررسي بيان آن با SDS-PAGE، اثر اين دو جهش بر روي فعاليت آنزيم مورد بررسي قرار گرفت.

Chitinases are one of the important industrial enzymes which have significant role in different industries such as digestion of chitin and chitoligosaccharides, bioremediation and control of plants pathogenic fungal as well as insects. This enzyme catalyzes the B 1?6 glycoside bond and then hydrolyses chitin polymers. chitinases consists of a (B/?)8-barrel catalytic domain contain of conserved sequence called DXDXE motif on B4 strand which D, E and residue around of this conserved sequence have essential role in cleavage and hydrolysis of the glycosidic bond. Study of active site adjacent amino acids can help us to understand their function in catalytic properties. In this project are mutated Ser390 and Gly191 for investigating role of this two residue existing in the adjacent of conserved sequence at catalytically process of Serratia marcescens B4A chitinase and after of cloning in expression vector and analysis of expression with SDS-PAGE are investigated effect of two mutations on the enzyme activity.