استفاده از miR-31-mimic جهت مهار متاستاز سرطان پستان در رده سلولي MDA-MB231 غني از سلول‌هاي بنيادي سرطاني

Inhibition of breast cancer metastasis by using miR-31-mimic in cancer stem cell rich MDA-MB231 cell line

زمينه و هدف: miRNA های مرتبط با متاستاز حوزه جديدی از درمان‌های متاستاز بر اساس miR را ايجاد كرده كه پتانسيل درمانی بالايی برای كشنده‌ترين جنبه سرطان، يعنی متاستاز دارد. miR-31 يك miRNA ضد متاستازی با عملكرد پليوتروپيك است كه بيان آن در سلول‌های متاستاتيك سرطان پستان به‌طور قابل‌توجهی كاهش می‌يابد. اين miRNA در چندين مرحله از آبشار متاستازی نقش دارد و استفاده از روش‌های بازيافت miR-31 می‌تواند روش كارآمدی برای مهار متاستاز باشد. روش بررسی: نوع مطالعه مقطعی می‌باشد كه در مهر سال 93-1392 در دانشگاه تربيت مدرس انجام شده است. اليگوی دورشته‌ای miR-31 بالغ بر اساس دستوركار توليد‌كننده كيت در وكتور pcDNA 6.2gw/EmGFP كلون شد. رده‌های سلولی سرطانی MDA-MB231 و MCF-7 پستان كشت داده شدند. miRNA آنها استخراج گرديد و بيان miR-31 پيش از تيمار با سازه حاوی miR-31 در دو رده سلولی و سلول‌های نرمال بافت پستان تعيين شد. سپس سازه حاوی miR-31 به دو رده سلولی ترانسفكت شد. بيان miR-31 پس از 48 ساعت ارزيابی شد و آزمايش‌های ايجاد خراش و سنجش تهاجم جهت ارزيابی ميزان مهاجرت و تهاجم انجام شد. يافته‌ها: نتايج Real-time polymerase chain reaction (PCR) پيش از ترانسفكشن سازه حاوی miR-31 كاهش چهار و بيش از 100 برابری بيان miR-31 را به‌ترتيب در MCF-7 و MDA-MB231 نسبت به سلول‌های نرمال پستان نشان داد ولی بررسی بيان پس از ترانسفكشن سازه حاوی miR به MDA-MB231 نشان‌دهنده افزايش قابل‌توجه در بيان miR-31 و كاهش 20 برابری خصوصيات تهاجمی و 10 برابری خصوصيت مهاجرتی نسبت به MCF-7 بود. نتيجه‌گيری: استفاده از miR-31 در درمان بر اساس بازيافت miR به‌وسيله miR-31-mimic امكان مهار كارآمد متاستاز را مطرح می‌كند.

Background: Metastasis associated miRNA (metastamiR) opened a new field of anti-metastatic therapy which have a great potential of treatment for the most lethal aspect of cancer, metastasis. The pleiotropic nature of gene regulation exhibited by certain miRNAs that showed that miRNAs might be endowed with a capacity to function as crucial modulators of tumor metastasis. MiR-31 is a pleiotropic anti-metastatic miRNA whose expression decreased significantly in metastatic breast cancer cells. MiR-31 has multiple roles in metastasis cascade. Therefore, using the miR-31-restoration based therapy could be an efficient anti-metastatic strategy for cancer therapy. Methods: This research was performed from May 2014 to October 2015 in Tarbiat Modares University in Tehran, Iran. The double-strand oligo of mature miR-31 was cloned into pcDNA 6.2gw/EmGFP according to the manufacturer instruction. The MDA-MB231, MCF-7 breast cancer cell lines were cultured and their miRNAs have been extracted. The expression of miR-31 has been quantified by Real time-PCR be-fore transfection of construct contained miR-31 into two cell lines and in normal breast cells. Then the constructs contain miR-31 have been transfected in to two cell lines. The expression of miR-31 has been quantified after 48 hours. Scratch and invasion as-say have been carried out for assessing the level of migration and invasion. Results: The result of Real time-PCR before transfection of constructs contained miR-31 have been shown 4 fold and more than 100 fold reduction in expression of miR-31 in MCF-7 and MDA-MB231 respectively in comparison to miR-31 expression in nor-mal breast cells, but after transfection of miR-31 construct to MDA-MB231 the quan-tification of expression showed the significant increase in mir-31 expression and 20 fold reduction in invasive and 10 fold reduction in migratory characteristics of MDA-MB231 in comparison to MCF-7. Conclusion: Metastasis associated miRNA have been represented a promising candi-dates in the field of anti-metastatic therapy and miR-31 as a powerful member of this family can function very effectively in order to inhibit the metastasis and introduce the new possibility of metastasis inhibition.